bloodjourГематология и трансфузиологияRussian journal of hematology and transfusiology0234-57302411-3042ООО Издательский дом «Практика»10.35754/0234-5730-2019-64-1-66-72bloodjour-126Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ ДЛЯ КОНТРОЛЯ СОДЕРЖАНИЯ ОСТАТОЧНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ В ПЛАЗМЕ КРОВИFLOW CYTOMETRY FOR MEASURING RESIDUAL LEUKOCYTES IN BLOOD PLASMAhttps://orcid.org/0000-0003-2860-7704КозыреваВ. С.KozyrevaV. S.

Козырева Виктория Сергеевна*, врач клинической лабораторной диагностики лаборатории клинической иммунологии отделения лабораторной диагностики 

тел.: +7 (913)757-64-03; 630050, г. Новосибирск, ул. Речкуновская, 15

Victoria S. Kozyreva, Medical Laboratory Scientist, Laboratory of Clinical Immunology, Department of Laboratory Diagnostics

tel.: +7 (913)757-64-03; 630050, Novosibirsk, Rechkunovskaya str., 15

vs_kozyreva@meshalkin.ruhttps://orcid.org/0000-0003-4263-7774ШиловаА. Н.ShilovaA. N.

Шилова Анна Николаевна, доктор медицинских наук, заведующий отделением лабораторной диагностики

Anna N. Shilova, Dr. Sci. (Med.), Head of the Department of Laboratory Diagnostics

https://orcid.org/0000-0002-4226-0172ШкодаО. В.ShkodaO. S.

Шкода Ольга Сергеевна, врач КЛД лаборатории клинической иммунологии отделения лабораторной диагностики

Olga S. Shkoda, Medical Laboratory Scientist, Department of Laboratory Diagnostics

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр имени академика Е.Н. Мешалкина» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияE.N. Meshalkin National Medical Research CenterRussian Federation2019100820196416672Copyright © Козырева В.С., Шилова А.Н., Шкода О.В., 20192019Козырева В.С., Шилова А.Н., Шкода О.В.Kozyreva V.S., Shilova A.N., Shkoda O.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.htjournal.ru/jour/article/view/126Введение

Введение. Иммунологическая и инфекционная безопасность компонентов крови является основным критерием качества трансфузионной терапии. Внедрение методов фильтрации крови способствует разработке методов валидации контроля остаточных лейкоцитов в продуктах крови. Необходим простой в исполнении и надежный метод подсчета остаточных лейкоцитов в продуктах крови.

Целью данного исследования была сравнительная характеристика использования проточного цитометра и гематологического анализатора для контроля содержания остаточных лейкоцитов в плазме крови.

Материалы и методы

Материалы и методы. В исследовании сравнили два метода подсчета остаточных лейкоцитов в 191 образце донорской плазмы, производимой в ФГБУ «НМИЦ им. акад. Е.Н. Мешалкина» Минздрава России, при помощи проточного цитометра (Navios Beckman Coulter) с использованием коммерческого набора реагентов LeukoSure и гематологического анализатора Sysmex XT-4000i.

Результаты

Результаты. Все проанализированные образцы плазмы соответствуют требованиям технического регламента. Большая часть образцов имела очень низкие количества остаточных лейкоцитов. Использование проточного цитометра Navios Beckman Coulter позволило определить в 83 % образцах количество лейкоцитов ≤15 кл в мкл, использование автоматического гематологического анализатора Sysmex XT-4000i для подсчета остаточных лейкоцитов в данном диапазоне ограничено чувствительностью прибора и отсутствием аттестованных контрольных материалов с низким содержанием лейкоцитов. Результаты текущего исследования показали, что подсчет остаточных лейкоцитов плазмы крови, оцененный с помощью проточного цитометра Navios Beckman Coulter, дает приемлемые результаты, он также наилучшим образом подходит для образцов с минимальным количеством клеток до 15 единиц в мкл.

Заключение

Заключение. Значительная вариабельность содержания остаточных лейкоцитов в образцах плазмы крови свидетельствует о целесообразности проверки содержания лейкоцитов во всех компонентах крови.

Background

Background. Immunological and infectious safety of blood components is considered to be a key condition for high-quality transfusion therapy. The progress of blood filtration methods contributes to the development of methods for the validation of residual leukocyte control in blood products.

The aim of the study was to compare the efficiency of flow cytometer with hematology analyzer for counting residual leukocytes in blood products

Methods

Methods. In this study, we compared the efficiency of two analytical instruments for counting residual leukocytes in 191 blood plasma samples: a flow cytometer (Navios Beckman Coulter) with a LeukoSure commercial reagent kit and a Sysmex XT4000i hematology analyzer.

Results

Results. All the samples under investigation met technical regulation requirements. Most of the samples were characterized by a significantly low amount of residual leukocytes, which fact presented a particular scientific interest. The use of a Navios Beckman Coulter flow cytometer and a commercial reagent kit allowed us to detect 15 or lower cells per μL in 83 % of the samples. The use of a Sysmex XT- 4000i automatic hematology analyzer for the calculation of residual white blood cells in this range proved to be limited due to the sensitivity of the device and the absence of certified reference materials with a low white blood cell count.

Conclusion

Conclusion. Our results show that a Navios Beckman Coulter flow cytometer with a commercial reagent kit is suitable for measuring residual leukocytes in blood plasma. This instrument is most appropriate for samples with a minimum number of cells. A significant variability of the amount of residual white blood cells in blood plasma confirms the importance of inspecting the content of leukocytes in all blood components.

компоненты кровиостаточные лейкоцитыпроточная цитометрияконтроль качестваtransfusion of blood componentsresidual leucocytesflow cytometryquality controlReferencesКостин А.И., Майорова О.А., Ложкин А.В. и др. К вопросу о контроле качества эритроцитсодержащих компонентов крови, обедненных лейкоцитами. Трансфузиология. 2011; 12(2): 12–33.Kostin A.I., Mayorova O.A., Lozhkin A.V., Pochtar’ M.E., Demicheva M.I., Kuzmichev V.A. On the issue of quality control of erythrocyte-containing blood components depleted of leukocytes. Transfuziologiya. 2011; 12(2): 12–33 (In Russian).Максимов В.А. Инфекционная безопасность донорской крови и ее компонентов. Санэпидемконтроль. Охрана труда. 2009; 3.Maksimov V.A. Infectious safety of donor blood and its components. Sanepidemkontrol’. Ohrana truda. 2009; 3 (In Russian).Постановление Правительства РФ от 26 января 2010 г. № 29 «Об утверждении технического регламента о требованиях безопасности крови, ее продуктов, кровезамещающих растворов и технических средств, используемых в трансфузионно-инфузионной терапии» (с изменениями и дополнениями).Resolution of the Government of the Russian Federation of January 26, 2010 No 29 “On approval of technical regulations on safety requirements for blood, its products, blood-substituting solutions and technical means used in transfusioninfusion therapy” (In Russian).Council of Europe Publishing. Strasbourg, France. Guide to the preparation use and quality assurance of blood components, 7th edition. 2001. 127–32.Council of Europe Publishing. Strasbourg, France. Guide to the preparation use and quality assurance of blood components, 7th edition. 2001; 127–32.Зарубин М.В., Саратова О.Е., Веревкина Л.Н., Жибурт Е.Б. Стратификация плазмы по содержанию лейкоцитов. Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины. 2015; 1: 67–70.Zarubin M.V., Saratova O.E., Verevkina L.N., Zhiburt E.B. Stratification of plasma by the content of leukocytes. Topical issues of transfusiology and clinical medicine. 2015; 1: 67–70 (In Russian).Dzik S., Moroff G., Dumont L. A multicenter study evaluating three methods for counting residual WBCs in WBC-reduced blood components: Nageotte haemocytometry, flow cytometry, and microfluorimetry. Transfusion. 2000; 40: 513–20.Dzik S., Moroff G., Dumont L. A multicenter study evaluating three methods for counting residual WBCs in WBC-reduced blood components: Nageotte haemocytometry, flow cytometry, and microfluorimetry. Transfusion. 2000; 40: 513–20.Van Der Meer P.F., Gratama J.W., Van Delden C.J., et al. Comparison of five platforms for enumeration of residual leucocytes in leucoreduced blood components. Br J Haematol. 2001; 115: 953–62.Van Der Meer P.F., Gratama J.W., Van Delden C.J., et al. Comparison of five platforms for enumeration of residual leucocytes in leucoreduced blood components. Br J Haematol. 2001; 115: 953–62.Dzik W.H., Ragosta A., Cusack W.F. Flow-cytometric method for counting very low numbers of leukocytes in platelet products. Vox Sang. 1990; 59: 153–9.Dzik W.H., Ragosta A., Cusack W.F. Flow-cytometric method for counting very low numbers of leukocytes in platelet products. Vox Sang. 1990; 59: 153–9.Palmer D.S., Birch P., O’Toole J., et al. Flow cytometric determination of residual white blood cell levels in preserved samples from leukoreduced blood products. Transfusion. 2008; 48(1): 118–28.Palmer D.S., Birch P., O’Toole J., et al. Flow cytometric determination of residual white blood cell levels in preserved samples from leukoreduced blood products. Transfusion. 2008; 48(1): 118–28.Adams M.R., Johnson D.K., Busch M.P., et al. Automated volumetric capillary cytometry for counting white cells in white cell-reduced plateletpheresis components. Transfusion. 1997; 37: 29–37.Adams M.R., Johnson D.K., Busch M.P., et al. Automated volumetric capillary cytometry for counting white cells in white cell-reduced plateletpheresis components. Transfusion. 1997; 37: 29–37.Wenz B., Burns E.R., Lee V., Miller W.K. A rare-event analysis model for quantifying white cells in white cell-depleted blood. Transfusion. 1991; 31: 156–9.Wenz B., Burns E.R., Lee V., Miller W.K. A rare-event analysis model for quantifying white cells in white cell-depleted blood. Transfusion. 1991; 31: 156–9.Barclay R., Walker B., Allan R., et al. Flow cytometric determination of residual leucocytes in filter-depleted blood products: an evaluation of Becton-Dickinson’s Leuco COUNT system. Transfus Sci. 1998; 19: 399–403.Barclay R., Walker B., Allan R., et al. Flow cytometric determination of residual leucocytes in filter-depleted blood products: an evaluation of Becton-Dickinson’s Leuco COUNT system. Transfus Sci. 1998; 19: 399–403.Lee T.H., Stromberg R.R, Heitman J., et al. Quantification of residual white cells in filtered blood components by polymerase chain reaction amplification of HLA DQ-A DNA. Transfusion 1994; 34: 986–94.Lee T.H., Stromberg R.R, Heitman J., et al. Quantification of residual white cells in filtered blood components by polymerase chain reaction amplification of HLA DQ-A DNA. Transfusion 1994; 34: 986–94.Dumont L.J., Dumont D.F. Enhanced flow cytometric method for counting very low numbers of white cells in platelet products. Cytometry. 1996; 26: 311–6.Dumont L.J., Dumont D.F. Enhanced flow cytometric method for counting very low numbers of white cells in platelet products. Cytometry. 1996; 26: 311–6.Dzik W.H., Rebulla P. Multicenter evaluation of methods for counting residual white cells in leukocyte-depleted red blood cells. Vox Sang. 1994; 66: 25–32.Dzik W.H., Rebulla P. Multicenter evaluation of methods for counting residual white cells in leukocyte-depleted red blood cells. Vox Sang. 1994; 66: 25–32.van der Meer P.F., Gratama J.W., van Delden C.J., et al. Comparison of five platforms for enumeration of residual leucocytes in leucoreduced blood components. Br. J. Haematol. 2001; 115: 953–62.van der Meer P.F., Gratama J.W., van Delden C.J., et al. Comparison of five platforms for enumeration of residual leucocytes in leucoreduced blood components. Br. J. Haematol. 2001; 115: 953–62.Kyriakou E., Nearchakos N., Bonovas S. Comparison between Nageotte and flow cytometric counting of residual leucocytes in freshly prepared leucocytereduced red blood cell components. Transfus Apher Sci. 2018. DOI: 10.1016/j. transci.2018.06.002 [Epub ahead of print]Kyriakou E., Nearchakos N., Bonovas S. Comparison between Nageotte and flow cytometric counting of residual leucocytes in freshly prepared leucocytereduced red blood cell components. Transfus Apher Sci. 2018. DOI: 10.1016/j. transci.2018.06.002 [Epub ahead of print]Masse M. Universal leukoreduction of cellular and plasma components: process control and performance of the leukoreduction process. Tranfus Clin Biol. 2001; 8: 297–302.Masse M. Universal leukoreduction of cellular and plasma components: process control and performance of the leukoreduction process. Tranfus Clin Biol. 2001; 8: 297–302.Muylle L. The role of cytokines in blood transfusion reactions. Blood Rev. 1995; 9: 77–83.Muylle L. The role of cytokines in blood transfusion reactions. Blood Rev. 1995; 9: 77–83.Sedlmayr P., Blaschitz A., Wilders-Truschnig M., et al. Platelets contain interleukin-1 alpha and beta which are detectable on the cell surface after activation. Scand J Immunol. 1995; 42: 209–14.Sedlmayr P., Blaschitz A., Wilders-Truschnig M., et al. Platelets contain interleukin-1 alpha and beta which are detectable on the cell surface after activation. Scand J Immunol. 1995; 42: 209–14.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.