bloodjourГематология и трансфузиологияRussian journal of hematology and transfusiology0234-57302411-3042ООО Издательский дом «Практика»10.35754/0234-5730-2021-66-1-37-53bloodjour-270Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESИдентификация групповых антигенов эритроцитов по системам ABO, RH и KEL серологическими тестами и методами генотипированияIdentifi cation of ABO, RH and KEL blood group antigens with serology and genotyping methodshttps://orcid.org/0000-0001-5912-3564ЧумакА. А.ChumakA. A.

Чумак Анна Александровна, кандидат медицинских наук, заведующая лабораторией HLA-типирования

125284, Москва

Anna A. Chumak, Cand. Sci. (Med.), Head of the Laboratory for HLA-typing

125284, Moscow

gella5@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8954-1281БеляковаВ. В.BelyakovaV. V.

Белякова Вера Владимировна, кандидат биологических наук, заведующая централизованной клинико-диагностической лабораторией

125284, Москва

Vera V. Belyakova, Cand. Sci. (Biol.), Head of the Central Clinical Diagnostic Laboratory

125284, Moscow

karnas@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8589-7122МайороваО. А.MaiorovaO. A.

Майорова Ольга Андреевна, доктор медицинских наук, профессор, главный врач

125284, Москва

Olga A. Maiorova, Dr. Sci. (Med.), Professor, СЕО

125284, Moscow

olgamai@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-9875-0085ПухликоваТ. В.PukhlikovaT. V.

Пухликова Татьяна Владимировна, кандидат биологических наук, биолог лаборатории HLA-типирования

125284, Москва

Tatiana V. Pukhlikova, Cand. Sci. (Biol.), Researcher (biology), Laboratory for HLA-typing

125284, Moscow

ptv-mos@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1782-284XКравчукО. А.KravchukO. A.

Кравчук Ольга Алексеевна, врач Централизованной клинико-диагностической лаборатории

125284, Москва

Olga A. Kravchuk, Physician, Central Clinical Diagnostic Laboratory

125284, Moscow

key900@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-7354-2383МишакинаС. В.MishakinaS. V.

Мишакина Светлана Владимировна, врач клинической лабораторной диагностики Централизованной клинико-диагностической лаборатории

125284, Москва

Svetlana V. Mishakina, Physician (clinical laboratory diagnostics), Central Clinical Diagnostic Laboratory

125284, Moscow

svetlanamishakina772@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0003-3053-7987ДонскаяО. В.DonskayaO. V.

Донская Ольга Владимировна, врач клинической лабораторной диагностики Централизованной клинико-диагностической лаборатории

125284, Москва

Olga V. Donskaya, Physician (clinical laboratory diagnostics), Central Clinical Diagnostic Laboratory

125284, Moscow

o.v.donskaya.126@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0003-4605-8315ДанилецВ. В.DaniletzV. V.

Данилец Виолетта Вячеславовна, заведующая отделением трансфузиологии

124489, Москва

Violetta V. Daniletz, Head of the Department of Transfusiology

124489, Moscow

gb3opk@yandex.ruГБУЗ «Центр крови имени О. К. Гаврилова» Департамента здравоохранения города МосквыРоссияMoscow City Blood Center named after O.K. GavrilovRussian FederationГБУЗ «ГКБ имени М. П. Кончаловского Департамента здравоохранения города Москвы»РоссияCity Clinical Hospital named after M.P. KonchalovskyRussian Federation2021180520216613753Copyright © Чумак А.А., Белякова В.В., Майорова О.А., Пухликова Т.В., Кравчук О.А., Мишакина С.В., Донская О.В., Данилец В.В., 20212021Чумак А.А., Белякова В.В., Майорова О.А., Пухликова Т.В., Кравчук О.А., Мишакина С.В., Донская О.В., Данилец В.В.Chumak A.A., Belyakova V.V., Maiorova O.A., Pukhlikova T.V., Kravchuk O.A., Mishakina S.V., Donskaya O.V., Daniletz V.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.htjournal.ru/jour/article/view/270Введение

Введение. Терапия компонентами крови востребована в травматологии, терапии, гематологии, родовспоможении, трансплантологии, что определяет важность тестирования групповых систем антигенов эритроцитов в  образцах крови доноров и реципиентов для обеспечения безопасности гемотрансфузий. Использование рутинных технологий для иммунологического типирования в большинстве случаев позволяет определить антигены, при исследовании которых наблюдаются слабые реакции агглютинации. Однако применение серологических методов имеет определенные ограничения, требующие использования технологий генотипирования.

Цель — оценить опыт использования серологических тестов и методов генотипирования при определении групповой принадлежности по системам ABO, RH и KEL.

Материалы и методы

Материалы и методы. Исследовали 55 489 образцов крови доноров, а также 1898 образцов крови больных. При затруднении интерпретации результата исследования (химеризм, панагглютинация, разночтение результатов) применяли методы генотипирования. Серологические исследования выполнены с помощью гелевой технологии. Выделение геномной ДНК проводили с использованием реагентов «Qiagen». Молекулярно-генетическое исследование эритроцитарных антигенов ABO, RH и KEL методом аллель-специфичной ПЦР выполняли с помощью реагентов производства BAG Diagnostics. Детекцию продуктов ПЦР осуществляли методом электрофореза в 2%-агарозном геле. Секвенирование по Сэнгеру было использовано в качестве вспомогательного метода генотипирования.

Результаты

Результаты. Применение серологических методов определения антигенов эритроцитов в  сочетании с  методами генотипирования позволило установить групповую и резус-принадлежность 26 доноров и больных, имевших трудноопределимые группы крови.

Заключение

Заключение. В случаях трудноопределимых групп крови наряду с серологическими методами исследования целесообразно использовать методы генотипирования.

Introduction

Introduction. Blood transfusion is a strong practice in traumatology, internal medicine, haematology, obstetrics and transplantation, which demands safety of haemotransfusion with estimating the red blood cell group antigens in donor and recipient blood. Routine immunotyping techniques usually provide for an antigen identification to weak subgroups, albeit with certain inherent limitations of serology tests that can be overcome in a genotyping approach.

Aim — performance assessment of serology and genotyping methods in the ABO, RH and KEL blood group identification.

Materials and methods

Materials and methods. A total of 55,489 donor and 1,898 patient blood samples have been analysed. Ambiguous cases of chimerism, panagglutination and inconsistent results were tackled with genotyping. Serology tests were performed with gel cards. Whole blood DNA extraction was performed with Qiagen chemistry. Allele-specific PCR was used for the erythrocyte ABO, RH and KEL antigen genotyping with BAG Diagnostics commercial kits and a 2% agarose gel product detection. Sanger sequencing was used to complement genotyping.

Results

Results. A combined use of serology tests and genotyping allowed a successful erythrocyte antigen-based blood group and Rh-status assignment in 26 donors and patients with ambiguous blood typing.

Conclusion

Conclusion. Genotyping coupled with serologic methods can be advised in a hampered blood group identification.

антигены эритроцитовгруппа крови ABOрезус-факториммуногематологиясерологические методыгенотипированиеerythrocyte antigensABO blood groupRh-factorimmunohaematologyserology testsgenotyping.ReferencesJavadzadeh S.H., Hayati A. Blood group discrepancies at a regional blood center. Int J Hematol Oncol Stem Cell Res. 2020; 14(1): 38–44.Javadzadeh Javadzadeh S.H., Hayati A. Blood group discrepancies at a regional blood center. Int J Hematol Oncol Stem Cell Res. 2020; 14(1): 38–44.Kaur G., Kaur P., Basu S., Kaur R. Blood group discrepancies at a tertiary care centre — analysis and resolution. Int J Lab Hematol. 2014; 36(4): 481–7. DOI: 10.1111/ijlh.12176.Kaur G., Kaur P., Basu S., Kaur R. Blood group discrepancies at a tertiary care centre — analysis and resolution. Int J Lab Hematol. 2014; 36(4): 481–7. DOI: 10.1111/ijlh.12176.Garratty G. Do we need to be more concerned about weak D antigens? Transfusion. 2005; 45(10): 1547–51. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2005.00625.x.Garratty G. Do we need to be more concerned about weak D antigens? Transfusion. 2005; 45(10): 1547–51. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2005.00625.x.Головкина Л.Л., Стремоухова А.Г., Пушкина Т.Д. и др. Молекулярногенетические методы для определения групп крови эритроцитарных систем. Справочник заведующего КДЛ. 2018; 9: 46–56.Golovkina L.L., Stremoukhova A.G., Pushkina T.D., et al. Molecular techniques for erythrocyte antigen blood typing. Spravochnik zavedujushego KDL. 2018; 9: 46–56 (In Russian).Goebel M., Halm-Heinrich I., Parkner A., et al. Novel ABO gene variant leads to discrepant results in forward/reverse and molecular blood grouping. Transfus Med Hemother. 2013; 40(6): 454–8. DOI: 10.1159/000356378.Goebel M., Halm-Heinrich I., Parkner A., et al. Novel ABO gene variant leads to discrepant results in forward/reverse and molecular blood grouping. Transfus Med Hemother. 2013; 40(6): 454–8. DOI: 10.1159/000356378.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/rs573234689#frequency_tabhttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/rs573234689#frequency_tabhttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/rs782058388#frequency_tabhttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/rs782058388#frequency_tabYip S.P. Sequence variation at the human ABO locus. Ann Hum Genet. 2002; 66(1): 1–27. DOI: 10.1017/S0003480001008995.Yip S.P. Sequence variation at the human ABO locus. Ann Hum Genet. 2002; 66(1): 1–27. DOI: 10.1017/S0003480001008995.Olsson M.L., Chester M.A. Heterogeneity of the blood group Ax allele: Genetic recombination of common alleles can result in the Ax phenotype. Transfus Med. 1998; 8(3): 231–8. DOI: 10.1046/j.1365-3148.1998.00161.x.Olsson M.L., Chester M.A. Heterogeneity of the blood group Ax allele: Genetic recombination of common alleles can result in the Ax phenotype. Transfus Med. 1998; 8(3): 231–8. DOI: 10.1046/j.1365-3148.1998.00161.x.Ogasawara K., Yabe R., Uchikawa M., et al. Molecular genetic analysis of variant phenotypes of the ABO blood group system. Blood. 1996; 88(7): 2732–7.Ogasawara K., Yabe R., Uchikawa M., et al. Molecular genetic analysis of variant phenotypes of the ABO blood group system. Blood. 1996; 88(7): 2732–7.Seltsam A., Das Gupta C., Bade-Doeding C., Blasczyk R. A weak blood group A phenotype caused by a translation-initiator mutation in the ABO gene. Transfusion. 2006; 46(3): 434–40. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2006.00740.x.Seltsam A., Das Gupta C., Bade-Doeding C., Blasczyk R. A weak blood group A phenotype caused by a translation-initiator mutation in the ABO gene. Transfusion. 2006; 46(3): 434–40. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2006.00740.x.Storry J.R., Olsson M.L. Genetic basis of blood group diversity. Br J Haematol. 2004; 126(6): 759–71. DOI: 10.1111/j.1365-2141.2004.05065.x.Storry J.R., Olsson M.L. Genetic basis of blood group diversity. Br J Haematol. 2004; 126(6): 759–71. DOI: 10.1111/j.1365-2141.2004.05065.x.Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека: Руководство по иммуносерологии. Москва: Бином; 2011: 1016 с.Donskov S.I., Morokov V.A. Human blood groups: an immunoserologic guide. Moscow: Binom. 2011. 1016 p. (In Russian)Головкина Л.Л., Каландаров Р.С., Стремоухова А.Г. и др. Дифференциация подгрупп А. и А2 антигена А системы АВО; биологическая основа и серологическая стратегия. Гематология и трансфузиология. 2019; 64(4): 504–15.Golovkina L.L., Kalandarov R.S., Stremoukhova A.G., et al. Distinguishing A1 and A2 subgroups of ABO system: biological background and serologic strategy. Russian journal of hematology and transfusiology. 2019; 64(4): 504–515. DOI: 10.35754/0234-5730-2019-64-4-504-515 (In Russian).Жибурт Е.Б. Учебник. Трансфузиология. Санкт-Петербург: Питер; 2002: 736 с.Zhiburt E.B. Textbook. Transfusiology. Saint-Petersburg: Piter; 2002: 736 p. (In Russian).Seltsam A., Hallensleben M., Kollmann A., Blasczyk R. The nature of diversity and diversification at the ABO locus. Blood. 2003; 102(8): 3035–42. DOI: 10.1182/blood-2003-03-0955.Seltsam A., Hallensleben M., Kollmann A., Blasczyk R. The nature of diversity and diversification at the ABO locus. Blood. 2003; 102(8): 3035–42. DOI: 10.1182/blood-2003-03-0955.Khorshidfar M., Chegini A., Pourfathollah A.A., et al. Establishing blood group genotyping to resolve ABO discrepancies in Iran. Indian J Hematol Blood Transfus. 2019; 35: 538–43. DOI: 10.1007/s12288-018-1044-8.Khorshidfar M., Chegini A., Pourfathollah A.A., et al. Establishing blood group genotyping to resolve ABO discrepancies in Iran. Indian J Hematol Blood Transfus. 2019; 35: 538–43. DOI: 10.1007/s12288-018-1044-8.Hosseini-Maaf B., Hellberg A., Chester A.M., et al. Structural basis for change in activity of naturally occurring mutants of six new identified B-subgroup alleles in human ABO. Transfusion. 2007; 47(5): 864–75. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2007.01203.x.Hosseini-Maaf B., Hellberg A., Chester A.M., et al. Structural basis for change in activity of naturally occurring mutants of six new identified B-subgroup alleles in human ABO. Transfusion. 2007; 47(5): 864–75. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2007.01203.x.Минеева Н.В. Основы иммуногематологии. Группы крови человека. Изд. 2-е. Санкт-Петербург; 2007: 188 с.Mineeva N.V. Fundamentals of immunohaematology. Human blood groups. 2nd edition. Saint-Petersburg. 2007. 188 p. (In Russian).Flegel W.A. Molecular genetics and clinical applications for RH. Transfus Apher Sci. 2011; 44(1): 81–91. DOI: 10.1016/j.transci.2010.12.013.Flegel W.A. Molecular genetics and clinical applications for RH. Transfus Apher Sci. 2011; 44(1): 81–91. DOI: 10.1016/j.transci.2010.12.013.Flegel W. The genetics of the Rhesus Blood Group system. Blood transfusion. 2007; 5: 50–7. DOI: 10.2450/2007.0011-07.Flegel W. The genetics of the Rhesus Blood Group system. Blood transfusion. 2007; 5: 50–7. DOI: 10.2450/2007.0011-07.Головкина Л.Л., Стремоухова А.Г., Пушкина Т.Д. и др. Молекулярносерологические характеристики типов слабого антигена D системы резус. Терапевтический архив. 2016; 88(7): 78–83. DOI: 10.17116/terarkh201688778-83f.Golovkina L.L., Stremoukhova A.G., Pushkina T.D., et al. Molecular and serologic traits of weak antigen D types in Rhesus system. Terapevticheskiy arkhiv. 2016; 88(7): 78–83. DOI: 10.17116/terarkh201688778-83f (In Russian).Shao C.P., Maas J.H., Su Y.Q., et al. Molecular background of Rh D-positive, D-negative, Del and weak D phenotypes in Chinese. Vox Sang. 2002; 83(2): 156–61. DOI: 10.1046/j.1423-0410.2002.00192.x.Shao C.P., Maas J.H., Su Y.Q., et al. Molecular background of Rh D-positive, D-negative, Del and weak D phenotypes in Chinese. Vox Sang. 2002; 83(2): 156–61. DOI: 10.1046/j.1423-0410.2002.00192.x.Wagner F.F., Gassner C., Müller T.H., et al. Molecular basis of weak D phenotypes. Blood. 1999; 93(1): 385–93.Wagner F.F., Gassner C., Müller T.H., et al. Molecular basis of weak D phenotypes. Blood. 1999; 93(1): 385–93.Wagner F.F., Frohmajer A., Flegel W.A. RHD positive haplotypes in D negative Europeans. BMC Genet. 2001; 2: 10. DOI: 10.1186/1471-2156-2-10.Wagner F.F., Frohmajer A., Flegel W.A. RHD positive haplotypes in D negative Europeans. BMC Genet. 2001; 2: 10. DOI: 10.1186/1471-2156-2-10.Sandler S.G., Flegel W.A., Westhoff C.M., et al.; College of American Pathologists Transfusion Medicine Resource Committee Work Group. It’s time to phase in RHD genotyping for patients with a serologic weak D phenotype. Transfusion. 2015; 55(3): 680–9. DOI: 10.1111/trf.12941.Sandler S.G., Flegel W.A., Westhoff C.M., et al.; College of American Pathologists Transfusion Medicine Resource Committee Work Group. It’s time to phase in RHD genotyping for patients with a serologic weak D phenotype. Transfusion. 2015; 55(3): 680–9. DOI: 10.1111/trf.12941.Levitt J., ed. Standards for blood banks and transfusion service. 29th ed. American Association of Blood Banks; Bethesda, MD: 2014. http://www.aabb.org/sa/standards/Pages/standards-resources.aspx.Levitt J., ed. Standards for blood banks and transfusion service. 29th ed. American Association of Blood Banks; Bethesda, MD: 2014. http://www.aabb.org/sa/standards/Pages/standards-resources.aspx.Flegel W.A. How I manage donors and patients with a weak D phenotype. Curr Opin Hematol. 2006; 13: 476–83. DOI: 10.1097/01.moh.0000245694.70135.c3.Flegel W.A. How I manage donors and patients with a weak D phenotype. Curr Opin Hematol. 2006; 13: 476–83. DOI: 10.1097/01.moh.0000245694.70135.c3.Pham B.N., Roussel M., Peyrard T., et al. Anti-D investigations in individuals expressing weak D Type 1 or weak D Type 2: allo- or autoantibodies? Transfusion. 2011; 51(12): 2679–85. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2011.03207.x.Pham B.N., Roussel M., Peyrard T., et al. Anti-D investigations in individuals expressing weak D Type 1 or weak D Type 2: allo- or autoantibodies? Transfusion. 2011; 51(12): 2679–85. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2011.03207.x.Постановление Правительства РФ от 22 июня 2019 г. № 797 «Об утверждении Правил заготовки, хранения, транспортировки и клинического использования донорской крови и ее компонентов и о признании утратившими силу некоторых актов Правительства Российской Федерации».Decree of the Government of the Russian Federation No. 797 of 22 June, 2019, “On approval of the rules for procurement, storage, transportation and clinical use of donor blood and its components and on expiration of certain acts of the Government of the Russian Federation”. (In Russian).Wagner F.F. RHD PCR of D-Negative Blood Donors. Transfus Med Hemother. 2013; 40(3): 172–81. DOI: 10.1159/000351604.Wagner F.F. RHD PCR of D-negative blood donors. Transfus Med Hemother. 2013; 40(3): 172–81. DOI: 10.1159/000351604.Головкина Л.Л., Стремоухова А.Г., Пушкина Т.Д. и др. Первый случай выявления фенотипа Rhnull системы Резус в России. Справочник заведующего КДЛ. 2015; 10: 14–20.Golovkina L.L., Stremoukhova A.G., Pushkina T.D., et al. First observation of Rhnull Rh-phenotype in Russia. Spravochnik zavedujushego KDL. 2015; 10: 14– 200 (In Russian).Flatt J.F., Musa R.H., Ayob Y., et al. Study of the D phenotype reveals erythrocyte membrane alterations in the absence of RHCE. Br J Haematol. 2012; 158: 262–73. DOI: 10.1111/j.1365-2141.2012.09149.x.Flatt J.F., Musa R.H., Ayob Y., et al. Study of the D phenotype reveals erythrocyte membrane alterations in the absence of RHCE. Br J Haematol. 2012; 158: 262–73. DOI: 10.1111/j.1365-2141.2012.09149.x.Pour M.S.S., Soleimany S., Ghasemimehr N., et al. A case report of a rare Rh phenotype: D–. Indian J Hematol Blood Transfus. 2019; 35: 402–4. DOI: 10.1007/s12288-019-01089-7.Pour M.S.S., Soleimany S., Ghasemimehr N., et al. A case report of a rare Rh phenotype: D–. Indian J Hematol Blood Transfus. 2019; 35: 402–4. DOI: 10.1007/s12288-019-01089-7.Denomme G.A. Prospects for the provision of genotyped blood for transfusion. Br J Haematol. 2013; 163: 3–9. DOI: 10.1111/bjh.12476.Denomme G.A. Prospects for the provision of genotyped blood for transfusion. Br J Haematol. 2013; 163: 3–9. DOI: 10.1111/bjh.12476.Flegel W.A., Wagner F.F. DEL. Blood Transfus. 2020; 18(3): 159–62. DOI: 10.2450/2020.0296-19.Flegel W.A., Wagner F.F. DEL. Blood Transfus. 2020; 18(3): 159–62. DOI: 10.2450/2020.0296-19.Standards for molecular testing for red cell, platelet, and neutrophil antigens. 5th ed. American Association of Blood Banks; Bethesda, MD: 2020. http://www.aabb.org/sa/standards/Pages/standards-resources.aspx.Standards for molecular testing for red cell, platelet, and neutrophil antigens. 5th ed. American Association of Blood Banks; Bethesda, MD: 2020. http://www.aabb.org/sa/standards/Pages/standards-resources.aspx.Denomme G.A., Flegel W.A. Applying molecular immunohematology discoveries to standards of practice in blood banks: Now is the time. Transfusion. 2008; 48(11): 2461–75. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2008.01855.x.Denomme G.A., Flegel W.A. Applying molecular immunohematology discoveries to standards of practice in blood banks: Now is the time. Transfusion. 2008; 48(11): 2461–75. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2008.01855.x.van der Schoot C.E., Veldhuisen B., de Haas M. Will genotyping replace serology in future routine blood grouping? – Opinion 5. Transfus Med Hemother. 2009; 36(3): 234–5. DOI: 10.1159/000214840.van der Schoot C.E., Veldhuisen B., de Haas M. Will genotyping replace serology in future routine blood grouping? – Opinion 5. Transfus Med Hemother. 2009; 36(3): 234–5. DOI: 10.1159/000214840.Reid M.E., Denomme G.A. DNA-based methods in the immunohematology reference laboratory. Transfus Apher Sci. 2011; 44(1): 65–72. DOI: 10.1016/j.transci.2010.12.011.Reid M.E., Denomme G.A. DNA-based methods in the immunohematology reference laboratory. Transfus Apher Sci. 2011; 44(1): 65–72. DOI: 10.1016/j.transci.2010.12.011

The authors declare that there are no conflicts of interest present.