bloodjourГематология и трансфузиологияRussian journal of hematology and transfusiology0234-57302411-3042ООО Издательский дом «Практика»10.18821/0234-5730-2017-62-1-4-8bloodjour-51Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESИММУНОФЕНОТИП ПЛАЗМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ НА ФОНЕ ВЫСОКОДОЗНОЙ ХИМИОТЕРАПИИ И ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ АУТОЛОГИЧНЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОКIMMUNOPHENOTYPE OF BONE MARROW PLASMA CELLS IN PATIENTS WITH MULTIPLE MYELOMA DURING HIGH-DOSE CHEMOTHERAPY AND AFTER AUTOLOGOUS STEM CELL TRANSPLANTATIONhttps://orcid.org/0000-0002-4966-8146МенделееваЛ. П.MendeleevaL. P.https://orcid.org/0000-0003-2892-5331АхундоваФ. M.AkhundovaF. M.rf-fina@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5829-9138НаумоваE. В.NaumovaE. V.

Moscow, 125993

https://orcid.org/0000-0002-8490-6066ГальцеваИ. В.GaltsevaI. V.https://orcid.org/0000-0002-8657-4990ПокровскаяО. C.PokrovskayaO. S.https://orcid.org/0000-0002-7944-6202СоловьевM. В.SolovievM. V.https://orcid.org/0000-0002-4155-7820ГрибановаЕ. О.GribanovaE. O.https://orcid.org/0000-0001-6201-6276КузьминаЛ. A.KuzminaL. A.https://orcid.org/0000-0001-6177-3566ПаровичниковаЕ. H.ParovichnikovaE. N.https://orcid.org/0000-0001-8188-5557СавченкоВ. Г.SavchenkoV. G.ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава РоссииРоссияNational Research Сenter for HematologyRussian Federation«Республиканская клиническая больница им. акад. М.А. Миркасимова» Минздрава АзербайджанаАзербайджанAcademician M.A. Mirgasimov Republic Clinical HospitalAzerbaijanФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Минздрава РоссииРоссияRussian Medical Academy of Postgraduate EducatonRussian Federation20170803201962148Copyright © Менделеева Л.П., Ахундова Ф.M., Наумова E.В., Гальцева И.В., Покровская О.C., Соловьев M.В., Грибанова Е.О., Кузьмина Л.A., Паровичникова Е.H., Савченко В.Г., 20192019Менделеева Л.П., Ахундова Ф.M., Наумова E.В., Гальцева И.В., Покровская О.C., Соловьев M.В., Грибанова Е.О., Кузьмина Л.A., Паровичникова Е.H., Савченко В.Г.Mendeleeva L.P., Akhundova F.M., Naumova E.V., Galtseva I.V., Pokrovskaya O.S., Soloviev M.V., Gribanova E.O., Kuzmina L.A., Parovichnikova E.N., Savchenko V.G.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.htjournal.ru/jour/article/view/51

Цель работы – изучить иммунофенотип плазматических клеток костного мозга у больных множественной миеломой (ММ) до и после трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ауто-ТГСК) и определить частоту достижения отсутствия минимальной резидуальной болезни (МРБ)- негативности в результате проведенного лечения. Материал и методы. Иммунофенотипирование плазматических клеток костного мозга выполнили 17 больным ММ в возрасте от 43 до 62 лет (медиана возраста 55 лет), с помощью 4-цветной проточной цитофлюориметрии на аппарате Cytomics FC 500 (“Beckman Coulter”, США). В работе использовали панель моноклональных антител CD138/CD38/CD45/CD19/CD117/CD56. Всего было подсчитано 200 000– 500 000 событий в исходном гейте по FS против SS, плазматические клетки выделяли в «гейте» CD138/ CD38. МРБ-негативность определяли в случае достижения порогового значения менее 0,01%. Всего было проанализировано 37 образцов костного мозга от 17 больных. Иммунофенотипирование выполняли: до 1-й ауто-ТГСК, после 1-й ауто-ТГСК и после 2-й ауто-ТГСК. Результаты и обсуждение. Во всех образцах костного мозга плазматические клетки характеризовались экспрессией обоих маркеров CD138/CD38, а также слабой экспрессией CD45 или ее отсутствием (CD45dim/neg-). Иммунофенотип плазматических клеток, представленный тремя маркерами CD19, CD117, CD56, изменялся на различных этапах лечения. При сравнении и анализе количественной экспрессии аберрантных маркеров перед и после 1-й ауто-ТГСК отмечалось статистически значимое их снижение (аберрантных плазматических клеток). У 6 (35,3%) из 17 больных удалось достичь МРБ-негативности после 1-й ауто-ТГСК. Иммунофенотипирование с помощью проточной цитофлюориметрии является высокочувствительным методом, позволяющим выявлять экспрессию аберрантных маркеров плазматических клеток, а также прослеживать их в динамике на фоне интенсивной терапии. В результате проведенного исследования была подтверждена эффективность высокодозной химиотерапии с последующей аутоТГСК. В процессе лечения выявлена гетерогенность аберрантной экспрессии плазматических клеток.

The aim of the study is to investigate the immunophenotype of bone marrow plasma cells in patients with multiple myeloma (MM) before and after the transplantation of autologous hematopoietic stem cells (autologous HSCT), and to assess response to the treatment determine the frequency of the lack of achievement of minimal residual disease (MRD) negativity as a result of the treatment. Material and methods. Immunophenotyping of marrow plasma cells was performed in 17 MM patients aged from 43 to 62 years (median age 55 years). Four color flow cytometry (Cytomics FC unit 500, "Beckman Coulter", USA) and the panel of monoclonal antibodies CD138/CD38/CD45/CD19/CD117/CD56 were used. In total, there were estimated 200,000--500,000 events in the initial Gate for forward scatter (FS) vs side scatter (SS). Plasma cells were isolated in Gate CD138/CD38. MRD-negativity was determined as the achievement of threshold value less than 0.01%. 37 bone marrow samples from 17 patients were analyzed. Immunophenotyping was performed before the 1st autologous HSCT, after the 1st autologous HSCT and after the 2nd autologous HSCT. Results and discussion. In all samples bone marrow plasma cells were characterized by the expression of both CD138/CD38 markers and weak expression or absence of expression of CD45 (CD45dim/neg-). The immunophenotype of plasma cells was presented by three markers CD19, CD117, CD56 and varied at different stages of the treatment. The analysis of the quantitative expression of aberrant markers before and after the 1st autologous HSCT revealed a statistically significant reduction of aberrant plasma cells. In 6 (35.3%) of 17 patients MRD-negativity was successfully achieved after the 1st autologous HSCT. Conclusion. Immunophenotyping by flow cytometry is a highly sensitive method. It permit to detect the expression of aberrant markers of plasma cells, to obtain their changes during the therapy. The efficacy of high-dose chemotherapy with following autologous HSCT was confirmed. The heterogeneity of aberrant expression of plasma cells was found.

множественная миеломаиммунофенотипированиепроточная цитофлюориметрияплазматические клеткиаберрантная экспрессиятрансплантация аутологичных гемопоэтических стволовых клетокминимальная резидуальная болезньmultiple myelomaimmunophenotypingflow cytometryplasma cellsaberrant expressiontransplantation of autologous hematopoietic stem cellsMinimal residual diseaseReferencesReed C.B., Reece D.E., Kukreti V., Mikhael J.R., Chen C., Trudel S., et al. Long-term with cyclophosphamide, bortezomib and dexamethasone induction therapy in patients with newly diagnosed multiple myeloma. Br. J. Haematol. 2014; 167(4): 563–5 doi: 10.1111/bjh.13004.Reed C.B., Reece D.E., Kukreti V., Mikhael J.R., Chen C., Trudel S., et al. Long-term with cyclophosphamide, bortezomib and dexamethasone induction therapy in patients with newly diagnosed multiple myeloma. Br. J. Haematol. 2014; 167(4): 563–5 doi: 10.1111/bjh.13004.San Miguel J.F., Schlag R., Khuageva N.K., Dimopoulos M.A., Shpilberg O., Kropff M., et al. Persistent overall survival benefit and no increased risk of second malignancies with bortezomib-melphalan prednisone versus melphalan-prednisone in patients with previously untreated multiple myeloma. J. Clin. Oncol. 2013; 31(4): 448–55. doi: 10.1200/JCO.2012.41.6180.San Miguel J.F., Schlag R., Khuageva N.K., Dimopoulos M.A., Shpilberg O., Kropff M., et al. Persistent overall survival benefit and no increased risk of second malignancies with bortezomib-melphalan prednisone versus melphalan-prednisone in patients with previously untreated multiple myeloma. J. Clin. Oncol. 2013; 31(4): 448–55. doi: 10.1200/JCO.2012.41.6180.Rajkumar S.V., Jacobus S., Callander N.S., Fonseca R., Vesole D.H., Williams M.E., et al. Lenalidomid plus high-dose dexamethasone versus lenalidomid plus low-dose dexamethasone as initial therapy for newly diagnosed multiple myeloma: an open-label randomized controlled trial. Lancet Oncol. 2010; 11(1): 29–37. doi: 10.1016/S1470-2045(09)70284-0.Rajkumar S.V., Jacobus S., Callander N.S., Fonseca R., Vesole D.H., Williams M.E., et al. Lenalidomid plus high-dose dexamethasone versus lenalidomid plus low-dose dexamethasone as initial therapy for newly diagnosed multiple myeloma: an open-label randomized controlled trial. Lancet Oncol. 2010; 11(1): 29–37. doi: 10.1016/S1470-2045(09)70284-0.Alexanian R., Weber D., Giralt S., Dimopoulos M., Delasalle K., Smith T., Champlin R. Impact of complete remission with intensive therapy in patients with responsive multiple myeloma. Bone Marrow Transplant. 2001; 27(10): 1037–43.Alexanian R., Weber D., Giralt S., Dimopoulos M., Delasalle K., Smith T., Champlin R. Impact of complete remission with intensive therapy in patients with responsive multiple myeloma. Bone Marrow Transplant. 2001; 27(10): 1037–43.Alvares C.L., Davies F.E., Horton C., Patel G., Powles R., Sirohi B., et al. Long-term outcomes of previously untreated myeloma patients: responses to induction chemotherapy and high-dose melphalan incorporated within a risk stratification model can help to direct the use of novel treatments. Br. J. Haematol. 2005; 129(5): 607–14.Alvares C.L., Davies F.E., Horton C., Patel G., Powles R., Sirohi B., et al. Long-term outcomes of previously untreated myeloma patients: responses to induction chemotherapy and high-dose melphalan incorporated within a risk stratification model can help to direct the use of novel treatments. Br. J. Haematol. 2005; 129(5): 607–14.O’Shea D., Giles C., Terpos E., Perz J., Politou M., Sana V., et al. Predictive factors for survival in myeloma patients who undergo autologous stem cell transplantation: a single-centre experience in 211 patients. Bone Marrow Transplant. 2006; 37(8):731–7.O’Shea D., Giles C., Terpos E., Perz J., Politou M., Sana V., et al. Predictive factors for survival in myeloma patients who undergo autologous stem cell transplantation: a single-centre experience in 211 patients. Bone Marrow Transplant. 2006; 37(8):731–7.Krejci M., Buchler T., Hajek R., Svobodnik A., Krivanova A., Pour L., et al. Prognostic factors for survival after autologous transplantation: a single centre experience in 133 multiple myeloma patients. Bone Marrow Transplant. 2005; 35(2): 159–64. doi:10.1038/sj.bmt.1704728.Krejci M., Buchler T., Hajek R., Svobodnik A., Krivanova A., Pour L., et al. Prognostic factors for survival after autologous transplantation: a single centre experience in 133 multiple myeloma patients. Bone Marrow Transplant. 2005; 35(2): 159–64. doi:10.1038/sj.bmt.1704728.Покровская О.С., Менделеева Л.П., Урнова Е.С., Гапонова Т.В., Гальцева И.В., Кузьмина Л.А. и др. Роль полной и очень хорошей частичной ремиссии в сохранении выживаемости без признаков прогрессии после трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток у больных множественной миеломой. Гематология и трансфузиология. 2012; 3(Прил.): 72.Pokrovskaya O.S., Mendeleeva L.P., Urnova E.S., Gaponova T.V., Galtseva I.V.,Kuzmina L.A., et al. The role of complete and very good partial remission in preservation of progression free survival after autologous stem cell transplantation among multiple myeloma patients. Hematology and Transfusiology. Russian journal (Gematologiya i transfusiologiya). 2012; 3(Suppl); 72 (abstr.). (in Russian)Покровская О.С., Менделеева Л.П., Капланская И.Б., Грибанова Е.О., Варламова Е.Ю., Обухова Т.Н. и др. Ангиогенез в костном мозге больных множественной миеломой на различных этапах высокодозной химиотерапии. Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. 2010; 4: 347–53.Pokrovskaya O.S., Mendeleeva L.P., Kaplanskaya I.B., Gribanova E.O., Varlamova E.Yu., Obuhova T.N., et al. Bone marrow angiogenesis in patients with multiple myeloma in different phases of high-dose therapy. Clinical oncohematology. Fundamental investigations and clinical practice. Russian journal (Klinicheskaya onkogematologiya. Fundamentalnie issledovaniya i klinicheskaya praktika). 2010; 4; 347–53. (in Russian)Pokrovskaya O., Mendeleeva L., Alekseeva I., Gaponova T., Urnova E., Gribanova E. Treatment of multiple myeloma with autologous stem cell transplantation: a long-term observation. Bone Marrow Transplant. 2011; 46(Suppl.1): P906 [poster]. Materials of the congrex. http://www.congrex.ch/2011/ebmt2011/pdf/ebmt2011_final_programme.pdfPokrovskaya O., Mendeleeva L., Alekseeva I., Gaponova T., Urnova E., Gribanova E. Treatment of multiple myeloma with autologous stem cell transplantation: a long-term observation. Bone Marrow Transplant. 2011; 46(Suppl.1): P906 [poster]. Materials of the congrex. http://www.congrex.ch/2011/ebmt2011/pdf/ebmt2011_final_programme.pdfKapoor P., Kumar S.K., Dispenzieri A., Lacy M.Q., Buadi F., Dingli D., et al. Importance of achieving stringent complete response after autologous stem-cell transplantation in multiple myeloma. J. Clin. Oncol. 2013; 31(36): 4529–35. doi: 10.1200/JCO.2013.49.0086.Kapoor P., Kumar S.K., Dispenzieri A., Lacy M.Q., Buadi F., Dingli D., et al. Importance of achieving stringent complete response after autologous stem-cell transplantation in multiple myeloma. J. Clin. Oncol. 2013; 31(36): 4529–35. doi: 10.1200/JCO.2013.49.0086.Kyle R.A., Rajkumar S.V. Criteria for diagnosis, staging, risk stratification and response assessment of multiple myeloma. Leukemia. 2009; 23(1): 3–9. doi:10.1038/leu.2008.291.Kyle R.A., Rajkumar S.V. Criteria for diagnosis, staging, risk stratification and response assessment of multiple myeloma. Leukemia. 2009; 23(1): 3–9. doi:10.1038/leu.2008.291.Liu H., Yuan C., Heinerich J., Braylan R., Chang M., Wingard J., Moreb J. Flow cytometric minimal residual disease monitoring in patients with multiple myeloma undergoing autologous stem cell transplantation: a retrospective study. Leuk. Lymphoma. 2008; 49(2): 306–14. doi: 10.1080/10428190701813018.Liu H., Yuan C., Heinerich J., Braylan R., Chang M., Wingard J., Moreb J. Flow cytometric minimal residual disease monitoring in patients with multiple myeloma undergoing autologous stem cell transplantation: a retrospective study. Leuk. Lymphoma. 2008; 49(2): 306–14. doi: 10.1080/10428190701813018.Rawstron A.C., Child J.A., de Tute R.M., Davies F.E., Gregory W.M., Bell S.E., et al. Minimal residual disease assessed by multiparameter flow cytometry in multiple myeloma: impact on outcome in the Medical Research Council Myeloma IX Study. J. Clin. Oncol. 2013; 31(20): 250–7. doi: 10.1200/JCO.2012.46.2119.Rawstron A.C., Child J.A., de Tute R.M., Davies F.E., Gregory W.M., Bell S.E., et al. Minimal residual disease assessed by multiparameter flow cytometry in multiple myeloma: impact on outcome in the Medical Research Council Myeloma IX Study. J. Clin. Oncol. 2013; 31(20): 250–7. doi: 10.1200/JCO.2012.46.2119.Paiva B., Vidriales M.B., Cerveró J., Mateo G., Pérez J.J., Montalbán M.A., et al.; GEM (Grupo Español de MM)/PETHEMA (Programa para el Estudio de la Terapéutica en Hemopatías Malignas) Cooperative Study Groups. Multiparameter flow cytometric remission is the most relevant prognostic factor for multiple myeloma patients who undergo autologous stem cell transplantation. Blood. 2008; 112(10): 4017–23. doi: 10.1182/blood-2008-05-159624.Paiva B., Vidriales M.B., Cerveró J., Mateo G., Pérez J.J., Montalbán M.A., et al.; GEM (Grupo Español de MM)/PETHEMA (Programa para el Estudio de la Terapéutica en Hemopatías Malignas) Cooperative Study Groups. Multiparameter flow cytometric remission is the most relevant prognostic factor for multiple myeloma patients who undergo autologous stem cell transplantation. Blood. 2008; 112(10): 4017–23. doi: 10.1182/blood-2008-05-159624.Rawstron A.C., Gregory W.M., de Tute R.M., Davies F.E., Bell S.E., Drayson M.T., et al. Minimal residual disease in myeloma by flow cytometry: independent prediction of survival benefit per log reduction. Blood. 2015; 125(12): 1932–5. doi:10.1182/blood-2014-07-590166.Rawstron A.C., Gregory W.M., de Tute R.M., Davies F.E., Bell S.E., Drayson M.T., et al. Minimal residual disease in myeloma by flow cytometry: independent prediction of survival benefit per log reduction. Blood. 2015; 125(12): 1932–5. doi:10.1182/blood-2014-07-590166.Greipp P.R., San Miguel J., Durie B.G., Crowley J.J., Barlogie B., Bladé J., et al. International staging system for multiple myeloma. J. Clin. Oncol. 2005; 23(15): 3412–20.Greipp P.R., San Miguel J., Durie B.G., Crowley J.J., Barlogie B., Bladé J., et al. International staging system for multiple myeloma. J. Clin. Oncol. 2005; 23(15): 3412–20.Paiva B., van Dongen J.J., Orfao A. New criteria for response assessment: role of minimal residual disease in multiple myeloma. Blood. 2015; 125(20): 3059–68. doi: 10.1182/blood-2014-11-568907.Paiva B., van Dongen J.J., Orfao A. New criteria for response assessment: role of minimal residual disease in multiple myeloma. Blood. 2015; 125(20): 3059–68. doi: 10.1182/blood-2014-11-568907.Arroz M., Came N., Lin P., Chen W.,Yuan C., LagooA., et al. Consensus guidelines on plasma cell myeloma minimal residual disease analysis and reporting. Cytometry B Clin. Cytom. 2016; 90(1): 31–9. doi: 10.1002/cyto.b.21228.Arroz M., Came N., Lin P., Chen W.,Yuan C., LagooA., et al. Consensus guidelines on plasma cell myeloma minimal residual disease analysis and reporting. Cytometry B Clin. Cytom. 2016; 90(1): 31–9. doi: 10.1002/cyto.b.21228.Rajkumar S.V., Dimopoulos M.A., Palumbo A., Blade J., Merlini G., Mateos M.V., et al. International Myeloma Working Group updated criteria for the diagnosis of multiple myeloma. Lancet Oncol. 2014; 15(12): e538–48. doi: 10.1016/S1470-2045(14)70442-5.Rajkumar S.V., Dimopoulos M.A., Palumbo A., Blade J., Merlini G., Mateos M.V., et al. International Myeloma Working Group updated criteria for the diagnosis of multiple myeloma. Lancet Oncol. 2014; 15(12): e538–48. doi: 10.1016/S1470-2045(14)70442-5.Kumar S., Paiva B., Anderson K.C., Durie B., Landgren O., Moreau P., et al. International Myeloma Working Group consensus criteria for response and minimal residual disease assessment in multiple myeloma. Lancet Oncol. 2016; 17(8): e328–46. doi: 10.1016/S1470-2045(16)30206-6.Kumar S., Paiva B., Anderson K.C., Durie B., Landgren O., Moreau P., et al. International Myeloma Working Group consensus criteria for response and minimal residual disease assessment in multiple myeloma. Lancet Oncol. 2016; 17(8): e328–46. doi: 10.1016/S1470-2045(16)30206-6.Rawstron A.C. Immunophenotyping of plasma cells. Curr. Protoc. Cytom. 2006; Ch. 6: Unit 6.23. OnLine. doi:10.1002/0471142956.cy0623s36.Rawstron A.C. Immunophenotyping of plasma cells. Curr. Protoc. Cytom. 2006; Ch. 6: Unit 6.23. OnLine. doi:10.1002/0471142956.cy0623s36.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.