bloodjourГематология и трансфузиологияRussian journal of hematology and transfusiology0234-57302411-3042ООО Издательский дом «Практика»10.25837/HAT.2018.48..2..003bloodjour-94Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ И ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЕ Т-КЛЕТОЧНОЙ КЛОНАЛЬНОСТИ В РАЗГРАНИЧЕНИИ ОПУХОЛЕВОЙ И РЕАКТИВНОЙ ПРОЛИФЕРАЦИИ БОЛЬШИХ ГРАНУЛЯРНЫХ ЛИМФОЦИТОВFLOW CYTOMETRY AND PCR-BASED T-CELL CLONALITY TESTING FOR DISCRIMINATING BETWEEN REACTIVE AND NEOPLASTIC PROLIFERATION OF LARGE GRANULAR LYMPHOCYhttps://orcid.org/0000-0002-0827-4052ЧерноваН. Г.ChernovaN. G.ngchernova@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1936-0084СидороваЮ. В.SidorovaYu. V.https://orcid.org/0000-0002-1884-352XЗахарькоЕ. И.ZakharkoE. I.https://orcid.org/0000-0002-6048-5746НаумоваЕ. В.NaumovaE. V.https://orcid.org/0000-0003-2424-9524РыжиковаН. В.RyzhikovaN. V.https://orcid.org/0000-0002-8490-6066ГальцеваИ. В.GaltsevaI. V.https://orcid.org/0000-0002-9877-0796ДвирныкВ. Н.DvirnykV. N.https://orcid.org/0000-0001-6220-8868СмирноваС. Ю.SmirnovaS. Yu.https://orcid.org/0000-0001-9463-9187СудариковА. Б.SudarikovA. B.https://orcid.org/0000-0003-0261-5941КохноА. В.KokhnoA. V.https://orcid.org/0000-0001-9591-8508МоисееваТ. Н.MoiseevaT. N.https://orcid.org/0000-0002-6405-3422ЛуговскаяС. А.LugovskayaS. A.https://orcid.org/0000-0002-2639-7419ЗвонковЕ. Е.ZvonkovE. E.https://orcid.org/0000-0001-8188-5557СавченкоВ. Г.SavchenkoV. G.ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава РоссииРоссияNational Research Center for HematologyRussian FederationФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава России, МоскваРоссияNational Research Center for Hematology, MoscowRussian FederationКафедра клинической лабораторной диагностики ФГБУЗ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России, МоскваРоссияDepartment of clinical laboratory diagnostics, Russian Medical Academy of Continuous Professional Education, MoscowRussian Federation201820042019632124133Copyright © Чернова Н.Г., Сидорова Ю.В., Захарько Е.И., Наумова Е.В., Рыжикова Н.В., Гальцева И.В., Двирнык В.Н., Смирнова С.Ю., Судариков А.Б., Кохно А.В., Моисеева Т.Н., Луговская С.А., Звонков Е.Е., Савченко В.Г., 20192019Чернова Н.Г., Сидорова Ю.В., Захарько Е.И., Наумова Е.В., Рыжикова Н.В., Гальцева И.В., Двирнык В.Н., Смирнова С.Ю., Судариков А.Б., Кохно А.В., Моисеева Т.Н., Луговская С.А., Звонков Е.Е., Савченко В.Г.Chernova N.G., Sidorova Y.V., Zakharko E.I., Naumova E.V., Ryzhikova N.V., Galtseva I.V., Dvirnyk V.N., Smirnova S.Y., Sudarikov A.B., Kokhno A.V., Moiseeva T.N., Lugovskaya S.A., Zvonkov E.E., Savchenko V.G.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.htjournal.ru/jour/article/view/94

Введение. Пролиферация больших гранулярных лимфоцитов (БГЛ) может быть ассоциирована с вирусной инфекцией, аутоиммунными заболеваниями или быть проявлением хронического лимфопролиферативного заболевания NK-клеток (ХЛПЗ-NK) и Т-клеточного лейкоза из больших гранулярных лимфоцитов (T-ЛБГЛ). Дифференциальная диагностика пролиферации БГЛ до сих пор представляет определенные трудности. Цель: оценить значение иммунофенотипирования методами проточной цитометрии и ПЦР-исследования Т-клеточной клональности в разграничении реактивной и опухолевой пролиферации БГЛ. Материалы и методы. Проведен анализ основных клинико-лабораторных показателей у 68 пациентов с БГЛ -лимфоцитозом (20 мужчин и 48 женщин) в возрасте от 22 до 79 лет (медиана возраста 53 года). Всем больным было выполнено цитологическое исследование мазка периферической крови, иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови методом проточной цитометрии, исследование Т-клеточной клональности методом ПЦР по реаранжировкам генов γ- и β-цепей T-клеточного рецептора. Результаты. В результате исследования было показано, что морфологические и иммунофенотипические признаки, относительный и абсолютный лимфоцитоз, гетерогенность экспрессии Т-клеточных маркеров не позволяют разграничить опухолевую и реактивную пролиферацию БГЛ. Наиболее специфичным для разграничения реактивного и опухолевого БГЛ -лимфоцитоза оказалось одновременное выявление моноклональности по TCRG (V γ-J γ) и TCRG (V β-J β) локусам или выявление полной реаранжировки TCRG (V β-J β).

Background. Proliferation of large granular lymphocytes (LGL) can be associated with viral infections, autoimmune disorders, chronic lymphoproliferative disorder of NK-cells (CLPD-NK), or T-cell large granular lymphocytic leukemia (T-LGL). Differential diagnosis between reactive and neoplastic LGL proliferation could be a challenge. Objective. To evaluate the role of morphological, immunophenotypic (flow cytometry) and molecular genetic (PCR-based T-cell clonality) studies in differential diagnosis of LGL proliferation. Materials and methods. 68 patients with increased peripheral blood LGL counts were enrolled in the study. Male/female ratio was 20/48; the median age was 53 (22—79) years. Blood smear, immunophenotyping by flow cytometry, and PCR-based T-cell clonality assays (TCRG (V γ-J γ) and TCRG (D β-J β and V β-J β)) were performed in all cases. Results. We found that morphology, immunophenotype, relative and absolute LGL counts, or heterogenic expression of T-cell markers can not distinguish between neoplastic and reactive LGL proliferation. Clonal TCRG (V γ-J γ) and TCRG (D β-J β) gene rearrangements were observed in reactive LGL lymphocytes and T-LGL. Complete rearrangements of TCRG (V β-J β) genes were specific for malignancies and were not detected in any case of reactive lymphocytosis.

большие гранулярные лимфоцитыхроническое лимфопролиферативное заболевание NK-клетокТ-клеточный лейкоз из больших гранулярных лимфоцитовпроточная цитометрияПЦР-исследование Т-клеточной клональностиклональные реаранжировкиlarge granular lymphocyteschronic lymphoproliferative disorder of NK-cellsT-cell large granular lymphocytic leukemiafl ow cytometryPCR-based T-cell clonality testingreactive lymphocytosisReferencesLoughran T. P. Jr. Clonal diseases of large granular lymphocytes. Blood. 1993; 82(1):1—14.Loughran T. P. Jr. Clonal diseases of large granular lymphocytes. Blood. 1993; 82(1):1—14.Sokol L., Loughran T. P. Jr. Large granular lymphocyte leukemia. Oncologist. 2006; 11(3):263—273. DOI: 10.1007/s11899-007-0038-7.Sokol L., Loughran T. P. Jr. Large granular lymphocyte leukemia. Oncologist. 2006; 11(3):263—273. DOI: 10.1007/s11899-007-0038-7.Lamy T., Loughran T. P. Jr. Large granular lymphocyte leukemia. Cancer Control. 1998; 5(1):25—33.Lamy T., Loughran T. P. Jr. Large granular lymphocyte leukemia. Cancer Control. 1998; 5(1):25—33.Swerdlow S. H., Campo E., Harris N. L. et al. WHO classification of tumors of haematopoietic and lymphoid tissues. Lyon: IARC; 2017, 348—350.Swerdlow S. H., Campo E., Harris N. L. et al. WHO classification of tumors of haematopoietic and lymphoid tissues. Lyon: IARC; 2017, 348—350.Zambello R., Trentin L., Facco M. et al. Analysis of the T cell receptor in the lymphoproliferative disease of granular lymphocytes: superantigen activation of clonal CD3+ granular lymphocytes. Cancer Res. 1995; 55(24):6140—6145.Zambello R., Trentin L., Facco M. et al. Analysis of the T cell receptor in the lymphoproliferative disease of granular lymphocytes: superantigen activation of clonal CD3+ granular lymphocytes. Cancer Res. 1995; 55(24):6140—6145.Виноградова Ю. Е., Луценко И. Н., Кременецкая А. М. и др. Структура T/NK-клеточных лимфатических опухолей в Гематологическом научном центре РАМН. Проблемы гематологии и переливания крови. 2005; 4:30—34.Vinogradova Yu. E., Lutsenko I. N., Kremenetskaya A. M. et al. Structure of T/NK-cell lymphomas in the National Research Center for Hematology of the Russian Academy of Medical Sciences. Russian Journal of Problems of Hematology and Blood Transfusion (Problemy gematologii i perelivaniya krovi). 2005; 50(4):30—34. (In Russian)Lamy T., Loughran T. P. Jr. Clinical features of large granular lymphocyte leukemia. Semin Hematol. 2003; 40(3):185—195.Lamy T., Loughran T. P. Jr. Clinical features of large granular lymphocyte leukemia. Semin Hematol. 2003; 40(3):185—195.Sampalo Lainz A., López-Gómez M., Jimenez-Alonso J. Proliferation of large granular lymphocytes in patients with systemic lupus erythematosus. Rev Clin Esp. 1995; 195(6):373—379.Sampalo Lainz A., López-Gómez M., Jimenez-Alonso J. Proliferation of large granular lymphocytes in patients with systemic lupus erythematosus. Rev Clin Esp. 1995; 195(6):373—379.Starkebaum G. Chronic neutropenia associated with autoimmune disease. Semin Hematol. 2002; 39(2):121—127.Starkebaum G. Chronic neutropenia associated with autoimmune disease. Semin Hematol. 2002; 39(2):121—127.Morice W. G., Kurtin P. J., Leibson P. J. et al. Demonstration of aberrant T-cell and natural killer-cell antigen expression in all cases of granular lymphocytic leukaemia. Br J Haematol 2003; 120(6):1026—1036.Morice W. G., Kurtin P. J., Leibson P. J. et al. Demonstration of aberrant T-cell and natural killer-cell antigen expression in all cases of granular lymphocytic leukaemia. Br J Haematol 2003; 120(6):1026—1036.Semenzato G., Zambello R., Starkebaum G. et al. The lymphoproliferative disease of granular lymphocytes: updated criteria for diagnosis. Blood. 1997; 89(1):256—260.Semenzato G., Zambello R., Starkebaum G. et al. The lymphoproliferative disease of granular lymphocytes: updated criteria for diagnosis. Blood. 1997; 89(1):256—260.Виноградова Ю. Е., Луценко И. Н., Самойлова Р. С. и др. Клинические и иммуноморфологические варианты Т/NK-клеточных лимфолейкозов из больших гранулярных лимфоцитов. Гематология и трансфузиология. 2009; 54(2):14—18.Vinogradova Yu. E., Lutsenko I. N., Samoylova R. S. et al. Clinical and immunomorphological variants of large granular lymphocyte T/NK lymphocytic leukemia. Russian Journal of Hematology and Transfusiology (Gematologiya i transfuziologiya). 2009; 54(2):14—18. (In Russian)Vie H., Chevalier S., Garand R. et al. Clonal expansion of lymphocytes bearing the gamma delta T-cell receptor in a patient with large granular lymphocyte disorder. Blood. 1989; 74(1):285—290.Vie H., Chevalier S., Garand R. et al. Clonal expansion of lymphocytes bearing the gamma delta T-cell receptor in a patient with large granular lymphocyte disorder. Blood. 1989; 74(1):285—290.Dongen J. J., Langerak A. W., Bruggemann M. et al. Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations: report of the BIOMED-2 Concerted Action BMH4-CT98-3936. Leukemia. 2003; 17(12):2257—2317. DOI: 10.1038/sj.leu.2403202.Dongen J. J., Langerak A. W., Bruggemann M. et al. Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations: report of the BIOMED-2 Concerted Action BMH4-CT98-3936. Leukemia. 2003; 17(12):2257—2317. DOI: 10.1038/sj.leu.2403202.Хайдуков С. В., Байдун Л. В. Современные подходы к оценке клеточной составляющей иммунного статуса. Медицинский алфавит. 2015; 2(8):44—51.Khaydukov S. V., Baydun L. V. Modern approach to assessing cellular constituents immune status. Russian Journal of Medical Alphabet. (Meditsinskiy alfavit). 2015; 2(8):44—51. (In Russian)Воробьев А. И., Воробьев И. А., Грецов Е. М. и др. Вопросы теоретической гематологии. Терапевтический архив. 2003; 75(9):22—29.Vorobiev A. I., Vorobiev I. A., Gretsov E. M. et al. Problems of the theoretical hematology. Russian Journal of Therapeutic Archive (Terapevticheskiy arkhiv). 2003; 75(9):22—29. (In Russian)O’Keefe C. L., Plasilova M., Wlodarski M. et al. Molecular analysis of TCR clonotypes in LGL:a clonal model for polyclonal responses. J Immunol. 2004; 172(3):1960—1969.O’Keefe C. L., Plasilova M., Wlodarski M. et al. Molecular analysis of TCR clonotypes in LGL:a clonal model for polyclonal responses. J Immunol. 2004; 172(3):1960—1969.Wlodarski M. W., O’Keefe C., Howe E. C. et al. Pathologic clonal cytotoxic T-cell responses: nonrandom nature of the T-cell-receptor restriction in large granular lymphocyte leukemia. Blood. 2005; 106(8):2769—2780. DOI: 10.1182/blood-2004-10-4045.Wlodarski M. W., O’Keefe C., Howe E. C. et al. Pathologic clonal cytotoxic T-cell responses: nonrandom nature of the T-cell-receptor restriction in large granular lymphocyte leukemia. Blood. 2005; 106(8):2769—2780. DOI: 10.1182/blood-2004-10-4045.Pandolfi F., Loughran T. P. Jr., Starkebaum G. et al. Clinical course and prognosis of the lymphoproliferative disease of granular lymphocytes. A multicenter study. Cancer. 1990; 65(2):341—348.Pandolfi F., Loughran T. P. Jr., Starkebaum G. et al. Clinical course and prognosis of the lymphoproliferative disease of granular lymphocytes. A multicenter study. Cancer. 1990; 65(2):341—348.Sidorova Yu. V., Chernova N. G., Ryzhikova N. V. et al. Clonal rearrangements and malignant clones in peripheral T-cell lymphoma. Acta Naturae (English version). 2015; 7(3):116—125.Sidorova Yu. V., Chernova N. G., Ryzhikova N. V. et al. Clonal rearrangements and malignant clones in peripheral T-cell lymphoma. Acta Naturae (English version). 2015; 7(3):116—125.Smirnova S., Sidorova Y., Chernova N. et al. CD8+ T-cell clones persistent in bone marrow and peripheral blood during course of CD4+ angioimmunoblastic T-cell lymphoma. Haematologica. 2017; 102(1):578, E1403.Smirnova S., Sidorova Y., Chernova N. et al. CD8+ T-cell clones persistent in bone marrow and peripheral blood during course of CD4+ angioimmunoblastic T-cell lymphoma. Haematologica. 2017; 102(1):578, E1403.Сидорова Ю. В., Никитин Е. А., Меликян А. Л. и др. Определение T-клеточной клональности при инфекционном мононуклеозе методом ПЦР-SSCP-TCR γ. Гематология и трансфузиология 2004; 49(6):1—7.Sidorova Yu. V., Nikitin E. A., Melikyan A. L. et al. Use of PCR-SSCPTCR γ method to determine T-cell clonality in infectious mononucleosis. Russian Journal of Hematology and Transfusiology (Gematologiya i transfuziologiya). 2004; 49(6):1—7. (In Russian)Smirnova S. J., Sidorova J. V., Biderman B. V. et al. Expansion of CD8+ cells in autoimmune hemolytic anemia. Autoimmunity. 2 016; 49(3):147— 154. DOI: 10.3109/08916934.2016.1138219.Smirnova S. J., Sidorova J. V., Biderman B. V. et al. Expansion of CD8+ cells in autoimmune hemolytic anemia. Autoimmunity. 2 016; 49(3):147— 154. DOI: 10.3109/08916934.2016.1138219.French L.E., Alcindor T., Shapiro M. et al. Identification of amplified clonal T cell populations in the blood of patients with chronic graftversus-host disease:positive correlation with response to photopheresis. Bone Marrow Transplant. 2002; 30(8):509—515. DOI: 10.1038/sj.bmt.1703705.French L.E., Alcindor T., Shapiro M. et al. Identification of amplified clonal T cell populations in the blood of patients with chronic graftversus-host disease:positive correlation with response to photopheresis. Bone Marrow Transplant. 2002; 30(8):509—515. DOI: 10.1038/sj.bmt.1703705.Narumi H., Kojima K., Matsuo Y. et al. T-cell large granular lymphocytic leukemia occurring after autologous peripheral blood stem cell transplantation. Bone Marrow Transplant. 2004; 33(1):99—101. DOI: 10.1038/sj.bmt.1704298.Narumi H., Kojima K., Matsuo Y. et al. T-cell large granular lymphocytic leukemia occurring after autologous peripheral blood stem cell transplantation. Bone Marrow Transplant. 2004; 33(1):99—101. DOI: 10.1038/sj.bmt.1704298.Au W. Y., Lam C. C., Lie A. K. et al. T-cell large granular lymphocyte leukemia of donor origin after allogeneic bone marrow transplantation. Am J Clin Pathol 2003; 120(4):626—630. DOI: 10.1309/VA75-5A03-PVRV-9XDT.Au W. Y., Lam C. C., Lie A. K. et al. T-cell large granular lymphocyte leukemia of donor origin after allogeneic bone marrow transplantation. Am J Clin Pathol 2003; 120(4):626—630. DOI: 10.1309/VA75-5A03-PVRV-9XDT.Sychevskaya K. A., Smirnova S., Sidorova J. et al. Clonal T-lymphocyte populations in healthy donors. Blood. 2017; 130(1):3598.Sychevskaya K. A., Smirnova S., Sidorova J. et al. Clonal T-lymphocyte populations in healthy donors. Blood. 2017; 130(1):3598.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.