Комплексное исследование случая редкого резус фенотипа

Введение. Система RH представлена основными антигенами D, C/c и E/e, кодируемыми двумя родственными генами RHD и RHCE. Однако бывают случаи, когда антигены системы RH не определяются при стандартном серологическом типировании. Например, фенотип –D– характеризуется отсутствием экспрессии антигенов C, c, E и e на поверхности эритроцитов вследствие различных генетических перестроек в гене RHCE.
Цель — представить обследование семьи, где у двух сибсов, кадровых доноров, определен дефицитный фенотип –D– при нормальном фенотипе резус у родителей.
Основные сведения. Проведено обследование семьи Н., состоящей из 4 человек: родителей и двух сыновей. Причиной обследования стал необычный фенотип –D– у сибсов, которые в настоящий момент являются кадровыми донорами. Все члены семьи идентифицировали себя как татары. Серологические исследования были выполнены с помощью гелевой технологии. Геномную ДНК членов семьи, а также кДНК сибсов исследовали методами аллельспецифичной полимеразной цепной реакции (ПЦР), экзон-специфичной ПЦР и секвенирования по Сэнгеру. Проводили анализ числа копий экзонов 1 и 7 для идентификации рекомбинаций генов RHD и RHCE, ставших причиной резус-дефицитного фенотипа. При серологическом типировании сибсов определялся только антиген D, в то время как антигены С/с и Е/е отсутствовали. Молекулярно-генетический анализ позволил предположить, что причиной фенотипа –D– у братьев стал гибридный аллель RHCE-D(3-8)-CE в гомозиготном статусе, образующий с нормальным аллелем RHD гаплотип, унаследованный от каждого родителя. Последовательность первых двух экзонов в гибридном аллеле соответствовала последовательности RHCE*C. Родители являются гетерозиготными носителями выявленного аллеля, поэтому экспрессия антигенов С/с и Е/е у них не нарушена.
Заключение. Идентификация генетических причин подобных вариантов у реципиентов необходима для обеспечения безопасности при переливании эритроцитсодержащих компонентов крови. Исследования доноров с резус-дефицитными фенотипами также целесообразно дополнять генотипированием для прогнозирования молекулярной структуры антигенов резус.

1. Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека: Руководство по иммуносерологии. М.: Бином, 2011. 1016 с.

2. Tippett P. A speculative model for the Rh blood groups. Ann Hum Genet. 1986; 50(3): 241–7. DOI: 10.1111/j.1469-1809.1986.tb01045.x.

3. Flegel W.A. The genetics of the Rhesus blood group system. Blood Transfus. 2007; 5(2): 50–7. DOI: 10.2450/2007.0011-07.

4. Ochoa-Garay G., Moulds J.M., Cote J., et al. New RHCE variant alleles encoding the D- - phenotype. Transfusion. 2013; 53(11 Suppl 2): 3018–23. DOI: 10.1111/trf.12404.

5. Avent N.D., Reid M.E. The Rh blood group system: a review. Blood. 2000; 95(2): 375–87.

6. Chérif-Zahar B., Raynal V., D’Ambrosio A.M., et al. Molecular analysis of the structure and expression of the RH locus in individuals with D--, Dc-, and DCwgene complexes. Blood. 1994; 84(12): 4354–60.

7. Rasmuson M., Heiken A. Frequency of occurrence of the human Rh Complexes D(C)(e), d(c)(e), D-- and ---. Nature. 1966; 212(5068): 1377–9. DOI: 10.1038/2121377a0.

8. Olafsdóttir S., Jensson O., Thordarson G., Sigurdardóttir S. An unusual Rhesus haplotype, --D--, in Iceland. Forensic Sci Int. 1983; 22(2–3): 183–7. DOI: 10.1016/0379-0738(83)90012-9.

9. Okuda H., Fujiwara H., Omi T., et al. A Japanese propositus with D-- phenotype characterized by the deletion of both the RHCE gene and D1S80 locus situated in chromosome 1p and the existence of a new CE-D-CE hybrid gene. J Hum Genet. 2000; 45(3): 142–53. DOI: 10.1007/s100380050201.

10. Kulkarni S., Mishra G., Maru H., et al. Molecular characterization of rare D- -/D-- variants in individuals of Indian origin. Blood Transfus. 2022; 20(1): 59–65. DOI: 10.2450/2020.0183-20.

11. Flatt J.F., Musa R.H., Ayob Y., et al. Study of the D-- phenotype reveals erythrocyte membrane alterations in the absence of RHCE. Br J Haematol. 201l; 158(2): 262–73. DOI: 10.1111/j.1365-2141.2012.09149.x.

12. Kappler-Gratias S., Auxerre C., Dubeaux I., et al. Systematic RH genotyping and variant identifi cation in French donors of African origin. Blood Transfus. 2014; 12 (Suppl 1): s264–72. DOI: 10.2450/2013.0270-12.

13. Tanaka M., Yamashita N., Takahashi J., et al. RHC/c genotyping based on polymorphism in the promoter region of the RHCE gene. Leg Med (Tokyo). 2001; 3(4): 205–12. DOI: 10.1016/s1344-6223(01)00035-9.

14. Fichou Y., Le Maréchal C., Bryckaert L., et al. A convenient qualitative and quantitative method to investigate RHD-RHCE hybrid genes. Transfusion. 2013; 53(11 Suppl. 2): 2974–82. DOI: 10.1111/trf.12179.

15. Pertl B., Pieber D., Panzitt T., et al. RhD genotyping by quantitative fl uorescent polymerase chain reaction: a new approach. BJOG. 2000; 107(12): 1498–502. DOI: 10.1111/j.1471-0528.2000.tb11674.x.

16. Wagner F.F., Flegel W.A. Review: the molecular basis of the Rh blood group phenotypes. Immunohematology. 2004; 20(1): 23–36.

17. Perry G.H., Xue Y., Smith R.S., et al. Evolutionary genetics of the human Rh blood group system. Hum Genet. 2012; 131(7): 1205–16 DOI: 10.1007/s00439-012-1147-5.

18. Huang C.H., Reid M.E., Chen Y. Identifi cation of a partial internal deletion in the RH locus causing the human erythrocyte D--phenotype. Blood. 1995; 86(2): 784–90.

19. Blunt T., Steers F., Daniels G., Carritt B. Lack of RH C/E expression in the Rhesus D--phenotype is the result of a gene deletion. Ann Hum Genet. 1994; 58(1): 19–24. DOI: 10.1111/j.1469-1809.1994.tb00722.x.

20. Hundhausen T., Petershofen E.K., Doescher A., et al. Pitfalls in Rhesus genotyping due to RHCE-D-CE hybrid genes. Vox Sang. 2002; 83: 268–72.

21. Avent N.D., Reid M.E. The Rh blood group system: a review. Blood. 2000; 95(2): 375–87.

22. Kemp T.J., Poulter M., Carritt B. A recombination hot spot in the Rh genes revealed by analysis of unrelated donors with the rare D-- phenotype. Am J Hum Genet. 1996; 59(5): 1066–73. Erratum in: Am J Hum Genet 1997; 60(3): 749.

23. Rochna E., Hughes-Jones N.C. The use of purifi ed 125-I-labelled anti-gamma globulin in the determination of the number of D antigen sites on red cells of different phenotypes. Vox Sang. 1965; 10(6): 675–86. DOI: 10.1111/j.1423-0410.1965.tb05179.x.

24. Mouro .I, Colin Y., Chérif-Zahar B., et al. Molecular genetic basis of the human Rhesus blood group system. Nat Genet. 1993; 5(1): 62–5. DOI: 10.1038/ng0993-62.

25. Silvy M., Chapel-Fernandes S., Beley S., et al. Molecular characterization of a new D- — haplotype in a Comorian man. Vox Sang. 2012; 103(4): 352–5. DOI: 10.1111/j.1423-0410.2012.01620.x.

26. Matassi G., Chérif-Zahar B., Mouro I., Cartron J.P. Characterization of the recombination hot spot involved in the genomic rearrangement leading to the hybrid D-CE-D gene in the D(VI) phenotype. Am J Hum Genet. 1997; 60(4): 808–17.

27. Okuda H., Suganuma H., Kamesaki T., et al. The analysis of nucleotide substitutions, gaps, and recombination events between RHD and RHCE genes through complete sequencing. Biochem Biophys Res Commun. 2000; 274(3): 670–83. DOI: 10.1006/bbrc.2000.3206.

28. Kemp T.J., Poulter M., Carritt B. Microsatellite variation within the human RHCE gene. Vox Sang. 1999; 77(3): 159–63. DOI: 10.1159/000031096.

29. Samareh Salavati Pour M., Soleimany S., et al. A Case Report of a Rare Rh Phenotype: D. Indian J Hematol Blood Transfus. 2019; 35(2): 402–4. DOI: 10.1007/s12288-019-01089-7.

30. Cheng G.J., Chen Y., Reid M.E., Huang C.H. Evans antigen: a new hybrid structure occurring on background of D and D-- Rh complexes. Vox Sang. 2000; 78(1): 44–51. DOI: 10.1159/000031148