Случай выявления редкого фенотипа Del у донора крови

Введение. Высокоиммуногенный антиген D — один из наиболее важных после групповых антигенов A и B. Многочисленные аллели гена RHD приводят кпоявлению новых фенотипов антигена D. Фенотип Del характеризуется сверхслабой экспрессией антигена D.

Цель: представить результаты типирования антигена D у донора крови с фенотипом Del.

Материалы иметоды. Для серологического типирования крови донора использовали технологию микроколоночной агглютинации и твердофазную микропланшетную технологию «Capture». Первичное генотипирование донора выполняли методом аллель-специфичной полимеразной цепной реакции (АСП-ПЦР). Был проведен поиск нуклеотидных замен методом секвенирования по Сэнгеру продуктов ПЦР экзонов гена RHD.

Результаты. При проведении серологического типирования с анти-D-антителами IgM и IgG с использованием твердофазной микропланшетной технологии был получен положительный результат. При определении парциальных вариантов антигена D однозначно интерпретировать полученные данные не получилось. Для идентификации вариантов антигена weak D потребовалось проведение молекулярно-генетического анализа. По результатам первичного генотипирования методом АСП-ПЦР было сделано предположение о делеции 9-го экзона гена RHD либо нуклеотидной замене в 9-м экзоне. По результатам секвенирования по Сэнгеру в экзоне 9 был обнаружен вариант нуклеотидной последовательности ДНК с. 1203T>A, приводящий к образованию стоп-кодона Tyr401Ter (rs759513820). Данный генетический вариант соответствует аллелю RHD*01EL.17. Антиген, кодируемый этим аллелем, относится к типу Del.

Заключение. Необходимо применять иммуногематологические методы в сочетании с молекулярно-генетическими методами для типирования антигена D у доноров крови с фенотипом Del с целью предотвращения аллоиммунизации антигеном D.

1. Nadarajan V.S. Serological analysis of Rh antigens: how far can we go? Ann Blood. 2023;8:40. DOI: 10.21037/aob-23-30.

2. Wagner F.F., Flegel W.A. RHD gene deletion occurred in the Rhesus box. Blood. 2000;95(12):3662–8. DOI: 10.1182/blood.v95.12.3662.012k12_3662_3668.

3. Wagner F.F., Moulds J.M., Flegel W.A. Genetic mechanisms of Rhesus box variation. Transfusion. 2005;45(3):338–44. DOI: 10.1111/j.15372995.2005.04339.x.

4. Geoff D., Imelda B. Essential Guide to Blood Groups. John Wiley & Sons, Nov 11, 2013. Medical. 131 p.

5. Westhoff C.M. The structure and function of the Rh antigen complex. Semin Hematol. 2007;44(1):42–50. DOI: 10.1053/j.seminhematol.2006.09.010.

6. Colin Y., Chérif-Zahar B., Le Van Kim C., et al. Genetic basis of the RhD-positive and RhD-negative blood group polymorphism as determined by Southern analysis. Blood. 1991;78(10):2747–52. DOI: 10.1182/blood.v78.10.2747.bloodjournal78102747.

7. Cruz B.R., Chiba A.K., Moritz E., et al. RHD alleles in Brazilian blood donors with weak D or D-negative phenotypes. Transfusion medicine. 2012;22(2):84–9. DOI: 10.1111/j.1365-3148.2011.01129.x.

8. Flegel W.A. Blood group genotyping in Germany. Transfusion. 2007;47(1 Suppl):47S–53S. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2007.01310.x.

9. Beckers E.A., Faas B.H., Ligthart P., et al. Lower antigen site density and weak D immunogenicity cannot be explained by structural genomic abnormalities or regulatory defects of the RHD gene. Transfusion. 1997;37(6):616–23. DOI: 10.1046/j.1537-2995.1997.37697335156.x.

10. Körmöczi G.F., Gassner C., Shao C.P., et al. A comprehensive analysis of DEL types: partial DEL individuals are prone to anti-D alloimmunization. Transfusion. 2005;45(10):1561–7. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2005.00584.x.

11. Kulkarni S., Mohanty D., Gupte S., et al. Flow cytometric quantification of antigen D sites on red blood cells of partial D and weak D variants in India. Transfus Med. 2006;16(4):285–9. DOI: 10.1111/j.13653148.2006.00667.x

12. Wagner F. F. Serology and molecular biology of DEL: a narrative review. Ann Blood 2023;8:28. DOI: 10.21037/aob-22-16.

13. Schmidt L.C., Castilho L., Vieira O.V., et al. Impact of a confirmatory RhD test on the correct serologic typing of blood donors. Rev Bras Hematol Hemoter. 201;37(5):302–5. DOI: 10.1016/j.bjhh.2015.06.001.

14. Fichou Y., Le Maréchal C., Jamet D., et al. Establishment of a medium-throughput approach for the genotyping of RHD variants and report of nine novel rare alleles. Transfusion. 2013;53(8):1821–8. DOI: 10.1111/trf.12009.

15. Cohn C., Delaney M., Johnson S., et al. Technical manual. 20th edition. Bethesda, MD: AABB, 2020.

16. Okubo Y., Yamaguchi H., Tomita T., et al. A D variant, Del? Transfusion. 1984;24(6):542. DOI: 10.1046/j.1537-2995.1984.24685066827.x.

17. Kwon D.H., Sandler S.G., Flegel W.A. DEL phenotype. Immunohematology. 2017;33(3):125–32. DOI: 10.21307/immunohematology-2019-019.

18. Flegel W.A., Wagner F.F. DEL. Blood Transfus. 2020;18(3):159–62. DOI: 10.2450/2020.0296-19.

19. Gassner C., Doescher A., Drnovsek T.D., et al. Presence of RHD in serologically D-, C/E+ individuals: a European multicenter study. Transfusion. 2005;45(4):527– 38. DOI: 10.1111/j.0041-1132.2004.04211.x.

20. Jeong D., Oh S., Song E.Y., et al. Molecular Characteristics of the Serological Weak D Phenotype in Koreans. Diagnostics. 2021;11(6):920. DOI: 10.3390/diagnostics11060920.

21. Hundhausen T., Petershofen E.K., Doescher A., et al. RHCE-D-CE hybrid genes can cause false-negative DNA typing of the Rh e antigen. Vox Sang. 2002;83(3):268–72. DOI: 10.1046/j.1423-0410.2002.00220.x.

22. International Society of Blood Transfusion Red Cell Immunogenetics and Blood Group Terminology. (ISBT 004) RHD blood group allelesv6.431-JUL-2023. https://www.isbtweb.org/resource/004rhd.html

23. Dajak S., Krstic J.L., Körmöczi G., et al. Characteristics and frequency of DEL phenotype detected by indirect antiglobulin test in Dalmatia county of Croatia. Transfus Apher Sci. 2014;50(2):210–3. DOI: 10.1016/j.transci.2014.01.019.

24. Gu J., Wang X.D., Shao C.P., et al. Molecular basis of DEL phenotype in the Chinese population. BMC Med Genet. 2014;15:54. DOI: 10.1186/1471-235015-54.

25. Wagner F.F., Frohmajer A., Flegel W.A. RHD positive haplotypes in D negative Europeans. BMC Genet. 2001;2:10. DOI: 10.1186/1471-2156-2-10.

26. Wagner F.F. RHD PCR of D-Negative Blood Donors. Transfus Med Hemother. 2013;40(3):172–81. DOI: 10.1159/000351604.

27. Polin H., Danzer M., Gaszner W., et al. Identification of RHD alleles with the potential of anti-D immunization among seemingly D-blood donors in Upper Austria. Transfusion. 2009;49(4):676–81. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2008.02046.x.

28. Krog G.R., Clausen F.B., Berkowicz A., et al. Is current serologic RhD typing of blood donors sufficient for avoiding immunization of recipients? Transfusion. 2011;51(11):2278–85. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2011.03156.x.