Введение. Биолюминесцентное мечение опухолевых клеток становится стандартом при проведении доклинических исследований новых противораковых препаратов. Несмотря на разнообразие люцифераз, многие из них не подходят для прижизненной визуализации.

Цель: сравнить различные субстраты NanoLucinvitro, атакже показать возможность использования пары NLuc/h-целентеразин для прижизненной визуализации диссеминированных опухолевых клеток с помощью системы IVIS Spectrum.

Материалы и методы. Получение целевой клеточной линии и Т-клеток, экспрессирующих химерные антигенные рецепторы (Chimeric antigen receptor, CAR), осуществляли методом лентивирусной трансдукции клеток, измерение люминесценции производили планшетным люминометром «Luminoskan™ Microplate Luminometer», для in vivo визуализации в экспериментальной модели CAR T-клеточной терапии на мышах линии NSG использовалась система прижизненной визуализации IVIS Spectrum.

Результаты. Проведено сравнение различных субстратов в тестах in vitro по сопоставлению яркости и стабильности люминесценции, а также показана возможность использования h-целентеразина в паре с люциферазой Nluc для прижизненной визуализации клеток в мышах. Получена генетически модифицированная клеточная линия Nalm6-NLuc-copGFP.

Заключение. Полученные результаты сравнения различных субстратов для люциферазы Nluc в тестах in vitro и in vivo позволили определить оптимальную пару фермент/субстрат, которая может быть востребована в качестве инструмента для исследований эффективности, безопасности и токсичности соединений и клеточных продуктов, разрабатываемых для противоопухолевой терапии. Плазмидная конструкция, кодирующая Nluc, может быть использована для модификации других клеточных линий, необходимых для разработки и характеризации новых генно-терапевтических подходов.

Введение. Важной характеристикой терапии модифицированными Т-клетками, экспрессирующими химерный антигенный рецептор (chimeric antigen receptor, CAR), является продолжительность персистенции CAR T-клеток в организме больного. Длительная рестимуляция CAR T-клеточного продукта in vitro с последующим анализом его субпопуляционного состава и цитотоксической активности является одним из способов моделирования поведения клеток в организме больных.

Цель: изучить иммунофенотип, показатели истощения и функциональные характеристики анти-CD19 CAR T-клеточных продуктов, полученных из клеток здоровых доноров и больных В-клеточным острым лимфобластным лейкозом (В-ОЛЛ), в условиях длительной рестимуляции in vitro.

Материалы и методы. Анти-CD19 CAR T-клеточный продукт получили из клеток 5 здоровых доноров и 3 больных B-ОЛЛ. Проведено изучение иммунофенотипа полученных клеточных продуктов в условиях повторяющейся антигенной рестимуляции in vitro с использованием таргетной клеточной линии NALM6, несущей антиген CD19, в течение 7–10 дней. В каждой точке эксперимента были оценены пролиферативная и цитотоксическая активность, экспрессия маркеров истощения и динамика изменения субпопуляционного состава CAR-Т-клеток памяти (иммунофенотип).

Результаты. Анти-CD19 CAR T-лимфоциты обладали выраженной цитотоксической активностью вне зависимости от источника лимфоцитов (здоровые доноры/больные). В процессе длительной антигенной рестимуляции всех клеточных продуктов наблюдалось уменьшение доли наивных (TN) и эффекторных (TE) CAR T-клеток и увеличение доли клеток центральной (ТСМ) и эффекторной памяти (ТЕМ). CAR T-клетки демонстрировали повышение экспрессии маркеров истощения (PD1, TIM3) вне зависимости от происхождения клеток и соотношения эффектор : таргет.

Заключение. Анализ цитотоксической активности и иммунофенотипического состава CAR T-клеточных продуктов в условиях длительной рестимуляции выявил тенденцию к снижению цитотоксической активности и отличия в динамике пролиферации и популяционного состава между клеточными продуктами, полученными от больных В-ОЛЛ и здоровых доноров.

Введение. Многопрофильный стационар скорой помощи является значимым потребителем концентратов тромбоцитов (КТ). Специфичность требований, особенности логистики и клинического использования КТ в многопрофильных стационарах могут влиять на стратегию заготовки данного компонента крови.

Цель: анализ практики применения КТ в многопрофильном стационаре, оказывающем скорую и неотложную помощь населению.

Материалы и методы. В ретроспективном обсервационном исследовании изучили 7049 трансфузий КТ в многопрофильном стационаре скорой помощи, выполненных за 5-летний период. Анализировали показания для трансфузий КТ, эффективность КТ, трансфузионную нагрузку на реципиента, экстренность выполнения трансфузий КТ, групповую идентичность использованных КТ, тип КТ, сравнили скорректированный прирост тромбоцитов (СПТ) через 24 ч после трансфузии различных видов КТ.

Результаты. От 23 до 29 % всех КТ были перелиты больным, поступившим с политравмой и массивной кровопотерей, 18–27 % КТ перелили больным с септическими осложнениями, 8–13 % — больным в период подготовки и послеоперационного ведения при трансплантации печени, 21 % — больным, которым проводили ЭКМО. По экстренным показаниям выполняли 31,8–40,7 % трансфузий КТ. В 61,5 % случаев показанием был геморрагический синдром в сочетании с тромбоцитопенией. АВ0-идентичные трансфузии были выполнены в 4723 (67,1 %) случаях. Не было достоверных различий в величине СПТ при применении аферезных, пулированных и криоконсервированных КТ.

Заключение. При планировании работы стационаров, оказывающих неотложную медицинскую помощь больным хирургического и травматологического профилей, следует учитывать потребность в трансфузии КТ 1,5–2 % больных, возможности экстренного обеспечения с применением инструментов «менеджмента тромбоцитов»: резерва КТ универсального донора — заготовленных на добавочном растворе или методом афереза от доноров группы AB или методом пулирования от доноров группы 0, криоконсервированных КТ.

Введение. Развитие тромботической микроангиопатии критических состояний — синдрома, подобного тромботической тромбоцитопенической пурпуре (ТТП-подобный синдром), — рассматривается с позиций дисбаланса в системе фактора Виллебранда — ADAMTS13, при этом мало изучены коагуляционные нарушения.

Цель: изучить динамику образования фибринового сгустка и генерации тромбина у больных с ТТП-подобным синдромом, а также сопоставить их с активацией/повреждением эндотелия, активностью естественных антикоагулянтов и комплемента.

Материалы и методы. В проспективное обсервационное когортное исследование включены 76 больных, перенесших хирургическое лечение порока сердца, у которых течение послеоперационного периода осложнилось ТТПподобным синдромом. Критерии включения больных в исследование: полиорганная недостаточность, тромбоцитопения <100×10⁹/л через 3 суток после операции, шистоцитоз >1 %. Образование фибрина и генерацию тромбина оценивали тестом «Тромбодинамика», определяли концентрации естественных антикоагулянтов, маркеры эндотелиального повреждения, активность компонентов системы комплемента.

Результаты. Летальность составила 40,8 % (31 больной). В результате анализа трех моделей установлено: 1) генерация тромбина определяется активностью системы комплемента; 2) увеличение концентрации естественных антикоагулянтов, прежде всего тромбомодулина, угнетает генерацию тромбина на активаторе и распространение волны его активации; 3) концентрация антикоагулянтов зависит от глубины повреждения эндотелия, начинающегося с десквамации его гликокаликса (отражается в повышении плазменной концентрации синдекана-1 и гепарансульфата) и заканчивающегося разрушением межклеточных контактов и некрозом эндотелиоцитов с высвобождением PECAM и VE-кадгерина; 4) эндотелиопатия обуславливает активацию и потребление тромбоцитов, а также гипоксию тканей.

Заключение. ТТП-подобный синдром характеризуется угнетением генерации тромбина, степень которого зависит от глубины повреждения эндотелия. Это обусловлено активацией систем естественных антикоагулянтов. Устойчивость эндотелия к мембран-атакующему комплексу снижается по мере увеличения десквамации его гликокаликса, что сопровождается углублением разрушения эндотелия. Параллельно происходит комплемент-опосредованная активация тромбоцитов. Повреждение эндотелия, развитие артериальных микротромбозов, несмотря на низкую генерацию тромбина, приводят к нарастанию гипоксического повреждения органов, ухудшению результатов лечения.

Введение. Эндопротезирование является единственным методом лечения терминальной стадии артропатии у больных гемофилией. Вместе с увеличением количества эндопротезирований растет и количество перипротезных инфекций (ППИ).

Цель: определить наиболее частых возбудителей и их чувствительность к антимикробным препаратам, а также факторы риска развития ППИ у больных гемофилией после эндопротезирования крупных суставов.

Материалы и методы. В ретроспективном исследовании проанализированы случаи ППИ у больных гемофилией, которым в период с 2015 по 2022 гг. было выполнено эндопротезирование крупных суставов, и возбудители данного осложнения

Результаты. Выявлены 80 случаев ППИ: у 61 (76,0 %) больного гемофилией А и у 19 (24 %) больных гемофилией В. Было 38 (47,5 %) случаев первичной инфекции, рецидив инфекции выявлен в 42 (52,5 %) эпизодах. Промывную систему с диоксидином или полигексадином использовали в 9 (11,2 %) случаях первичной инфекции, во всех остальных случаях применяли тактику двухэтапной ревизии. Выявлено 20 различных возбудителей: 58 (65,0 %) грамположительных патогенов, 13 (14,0 %) грамотрицательных патогенов, 3 (3,0 %) эпизода грибкового поражения. Установить возбудитель в 16 (18,0 %) случаях не удалось. Наиболее частыми возбудителями явились S. aureus (21,1 %) и S. epidermidis (21,1 %), E. faecalis (7,3 %). Среди изолятов S. aureus было обнаружено 18,8 % метициллин-резистентных штаммов. Среди грамотрицательных бактерий вывлены P. aeruginosa в 6 (7,3 %) случаях, все они имели множественную антибиотикорезистентность. Количество случаев ППИ, возникших в первый месяц или первый год, незначительно отличалось от эпизодов, когда инфекционные осложнения возникли в период от года и более. ППИ после ревизионного эндопротезирования чаще всего дебютировали в период от оперативного вмешательства до 12 мес.

Заключение. Наибольший риск возникновения ППИ у больных гемофилией после ревизионного эндопротезирования в течение года после операции. ППИ у больных гемофилией возникает чаще, чем в общей популяции, что обусловлено большим количеством факторов риска у больных гемофилией в сравнении с общей популяцией больных.

Введение. Дефицит глюкозо-6-фосфатизомеразы (ГФИ) относится к наследственным несфероцитарным гемолитическим анемиям, имеющим аутосомно-рецессивный тип наследования.

Цель: изучить клинические и генетические данные больных с дефицитом ГФИ.

Больные и методы. В одноцентровом ретроспективном исследовании проанализированы данные медицинской документации больных до 18 лет, которые обращались в ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Д. Рогачева» Минздрава России в период с 2018 по 2024 г. В анализ включены 13 больных из 12 семей, среди них 2 девочки и 11 мальчиков, медиана возраста постановки диагноза — 3,5 года.

Результаты. Все больные имели различной степени тяжести гемолитическую анемию и двое больных из одной семьи имели неврологические симптомы (эпилепсия, тетрапарез, задержка психомоторного развития). Троим больным была выполнена спленэктомия в связи с высокой трансфузионной зависимостью, после чего у них наблюдалось улучшение, однако полного прекращения гемолиза не произошло. Среди больных были идентифицированы 14 различных мутаций в гене GPI, 8 из которых ранее не были описаны. Их патогенность была определена различными алгоритмами.

Заключение. Дефицит ГФИ характеризуется высокой вариабельностью клинических проявлений, требующей индивидуализированного подхода к диагностике и терапии. Полученные результаты подтверждают значимость комплексного обследования, включающего лабораторные и молекулярно-генетические методы.

Введение. Цикл производства Т-лимфоцитов с химерным антигенным рецептором (chimeric antigen receptor, СAR) включает в себя несколько последовательных стадий, параметры которых могут влиять на эффективность трансгенных клеток: получение клеточного материала больного, выделение целевой популяции Т-лимфоцитов, активация, трансдукция клеток вирусным вектором, несущим CAR конструкт, и экспансия полученных CAR T-клеток с дальнейшим введением больному.

Цель: рассмотреть влияние каждого из этапов производства CAR T-клеток на показатели эффективности клеточного продукта в in vitro и in vivo экспериментах, а также при клиническом применении.

Основные сведения. Проведен анализ особенностей производства различных CAR T-клеточных препаратов. Обсуждено, как характеристики производства препарата и структуры химерного антигенного рецептора влияют на противоопухолевую эффективность и профиль безопасности клеточного продукта. Получение CAR T-клеточного продукта — многофакторный процесс, который требует оптимизации параметров и обязан учитывать особенности исходного сырья.

Введение. Внедрение терапии Т-клетками с химерным антигенным рецептором (Chimeric antigen receptor, CAR T) в клиническую практику изменило международные стандарты лечения B-клеточных лейкозов, лимфом и множественной миеломы. Наряду с высокой противоопухолевой активностью CAR T-терапия сопровождается нежелательными явлениями: синдром высвобождения цитокинов (СВЦ), с иммунными клетками ассоциированный нейротоксический синдром (ИКАНС), синдром активации макрофагов (САМ).

Цель — представить данные о механизмах иммунной токсичности CAR T-терапии, ее клинических проявлениях, а также стратегиях профилактики и лечения.

Основные сведения. СВЦ — гипервоспалительное состояние, в основе клинических проявлений которого лежат активация и нарушение проницаемости эндотелия. Генетическая предрасположенность к СВЦ связана с полиморфизмом генов адгезии и активации иммунных клеток. В патогенезе играют роль гиперпродукция цитокинов интерлейкинов 1β, 6, 8, 10, интерферона-γ, снижение экспрессии молекул адгезии эндотелием, гиперпродукция факторов проницаемости, интерстициальный отек органов и их дисфункция. Другие осложнения: ИКАНС и САМ. Терапия СВЦ основывается на применении глюкокортикоидов и антицитокиновой терапии. Значительная доля негативных исходов связана с ИКАНС и САМ. Перспективным направлением лечения является применение антагонистов интерлейкина-1.

Введение. Традиционные методы предтрансплантационного кондиционирования провоцируют острые повреждения органов. Более безопасны иммунотерапевтические препараты, нацеленные на различные маркеры клеток крови. Такой потенциал имеется у препаратов на основе цитотоксических иммунных клеток. Их использование позволит совместить два этапа терапии — удаление остаточного опухолевого клона и элиминацию гемопоэза, увеличив тем самым вероятность приживления трансплантата без развития реакции «трансплантат против хозяина».

Цель: систематизировать информацию о применении клеточной терапии у больных гемобластозами и оценить роль такой терапии при подготовке больных к трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК).

Основные сведения. Проведен анализ роли и существующих режимов кондиционирования. Обсуждены подходы к использованию иммунотерапевтических агентов на основе цитотоксических иммунных клеток для лечения больных гемобластозами, обозначена роль такой терапии при подготовке больных к ТГСК.

Введение. Фолликулярная лимфома (ФЛ) — самая частая индолентная лимфома. Несмотря на продолжительную общую выживаемость, опухоль остается неизлечимой у большинства больных. Не существует алгоритма выбора лечения ФЛ после 3 линий терапии. Терапия Т-лимфоцитами с химерным антигенным рецептором (chimeric antigen receptor, СAR) оказалась эффективной при ФЛ.

Цель: систематизировать данные об эффективности и безопасности современной CAR T терапии при ФЛ.

Основные сведения. CAR T терапия — это лечебная опция для больных ФЛ как после множества курсов терапии, так и с первично рефрактерной опухолью. Продолжается совершенствование этого метода, улучшается безопасность и расширяются возможности использования, проводится интеграция CAR T терапии в противорецидивные схемы ФЛ.

Введение. Высокоиммуногенный антиген D — один из наиболее важных после групповых антигенов A и B. Многочисленные аллели гена RHD приводят кпоявлению новых фенотипов антигена D. Фенотип Del характеризуется сверхслабой экспрессией антигена D.

Цель: представить результаты типирования антигена D у донора крови с фенотипом Del.

Материалы иметоды. Для серологического типирования крови донора использовали технологию микроколоночной агглютинации и твердофазную микропланшетную технологию «Capture». Первичное генотипирование донора выполняли методом аллель-специфичной полимеразной цепной реакции (АСП-ПЦР). Был проведен поиск нуклеотидных замен методом секвенирования по Сэнгеру продуктов ПЦР экзонов гена RHD.

Результаты. При проведении серологического типирования с анти-D-антителами IgM и IgG с использованием твердофазной микропланшетной технологии был получен положительный результат. При определении парциальных вариантов антигена D однозначно интерпретировать полученные данные не получилось. Для идентификации вариантов антигена weak D потребовалось проведение молекулярно-генетического анализа. По результатам первичного генотипирования методом АСП-ПЦР было сделано предположение о делеции 9-го экзона гена RHD либо нуклеотидной замене в 9-м экзоне. По результатам секвенирования по Сэнгеру в экзоне 9 был обнаружен вариант нуклеотидной последовательности ДНК с. 1203T>A, приводящий к образованию стоп-кодона Tyr401Ter (rs759513820). Данный генетический вариант соответствует аллелю RHD*01EL.17. Антиген, кодируемый этим аллелем, относится к типу Del.

Заключение. Необходимо применять иммуногематологические методы в сочетании с молекулярно-генетическими методами для типирования антигена D у доноров крови с фенотипом Del с целью предотвращения аллоиммунизации антигеном D.